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일반기술 생명과학 > 유전자 재조합 기술

신규한 내열성 DNA 중합효소

● 내열성 DNA 중합효소로 처음 특성이 밝혀진 Taq DNA 중합효소는 써머스 아쿠아티쿠스(Thermus aquaticus, Taq.)로부터 분리되었고 이후 많은 써머스 속 세균으로부터 Tfl 중합효소, Tth 중합효소, Tca 중합효소, Tfi 중합효소, Top 중합효소 등이 분리되어 PCR에 적용 ● 역전사 활성에 있어서는 대장균의 Pol Ⅰ이 이런 활성을 가지는 것으로 오래전부터 알려져 왔지만, PCR의 출현 후 Taq 중합효소의 역전사 활성을 이용하여 mRNA로부터 한번에 PCR까지 수행하는 방법이 보고되었지만 증폭에는 다량(1-5 ㎍)의 RNA가 필요하거나 소량의 RNA를 검출하기 위해서는 노던 혼성화(Northern hybridization)가 필요하였기 때문에 실용적이지 않음 ● 기존기술에 뉴클레오타이드 증폭 방법과 달리, DNA 중합효소의 역전사 활성을 이용하여 mRNA로부터 한 번에 뉴클레오타이드를 증폭할 수 있으며, 다량의 RNA를 필요로 하지 않는 경제적인 호열성 DNA 중합효소를 발굴하고자 한 노력의 일환으로 온천수에서 분리한 호열성 써머스 써머필러스 HJ6(Thermus thermophilus HJ6) 균주로부터 상기의 활성을 갖는 DNA 중합효소 유전자를 클로닝하고 염기서열을 확인하였으며, 이를 이용하여 뉴클레오타이드 증폭 및 역전사활성을 분석함으로써 해당 기술을 완성함 ● 해당 기술은 신규한 아미노산 서열로 이루어진 Tod DNA 중합효소 및 이를 코딩하는 핵산 분자에 관한 것으로 해당 기술의 Tod DNA 중합효소를 이용하면 RNA를 주형으로 역전사 단계 및 cDNA 증폭 단계가 하나의 효소를 이용하여 진행될 수 있으며, 다량의 RNA를 이용하지 않고도 신속하고 경제적으로 뉴클레오타이드를 증폭할 수 있음● 유전자 증폭용 DNA 중합효소는 세계시장이 4천억원 규모로 수입대체효과 및 내수, 수출 등으로 고부가가치 창출 기대● 내열성 DNA polymerase의 DNA 중합반응 및 역전사 반응을 이용하여 PCR 및 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)에 활용 → 내열성 DNA polymerase의 대량생산을 통하여 PCR 효소의 저비용 생산 및 상품 다양성 추구 ● Single tube RT-PCR용 내열성 중합효소(Tod polymerase)로 상업화 가능

보유기관

한국해양수산기술진흥원

등록일

2009-05-07

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일반기술 생명과학 > 유전자 재조합 기술

한우의 경제형질과 연관된 마이크로새틀라이트 ＤＮＡ프라이머

해당 기술은한우의 경제형질과 연관성 있는 마이크로새틀라이트 DNA 프라이머에 <2> 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 해당 기술은한우의 세균인공염색체(BAC) 클론의 말단 염기서열에서 밝혀진 한우의 고유한 경제형질 마이크로새틀라이트 DNA 프라이머에 관한 것이다.마이크로새틀라이트(microsatellite)는 2 내지 6개 정도의 염기서열이 반복되는 DNA군으로, 게놈 내에 골고루 분포하고 높은 다형성을 나타내는 비암호화 DNA 서열(non-coding DNA sequence)에 해당한다. 특정 좌위에서 반복단위의 반복수에 따라 개체간의 다양성이 인정되는데, 반복수에 품종간 다형이 있는 경우에 인접영역에 설계한 프라이머를 이용하여 중합효소연쇄반응(PCR)을 행하면, PCR 산물 길이에 다형이 관찰되고, DNA 다형을 검출하는 것이 가능하다.해당 기술의 상기 목적은 한우 BAC DNA를 분리하고 한우 마이크로새틀라이트 DNA 염기서열을 분석한 다음 한우 마이크로새틀라이트 DNA 프라이머를 제작한 후 상기 한우 마이크로새틀라이트 DNA 프라이머의 검정 및 경제형질을 분석함으로써 달성하였다.한우의 고유한 마이크로새틀라이트 DNA를 탐색하기 위하여 제작된 해당 기술 HWYU2TA-165 프라이머는 156 bp 대립유전자에서 나타나는 유전자 마커(DNA marker)의 유무를 분석함으로써 한우의 우수개체의 판별, 우수 종축의 선발 및 고급육 집단의 사양관리의 선정에 뛰어난 효과가 있으므로 한우 축산산업상 매우 유용한 기술인 것이다.

보유기관

포항기술이전센터

등록일

2009-07-09

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