일반기술

자궁경부암 항암제 및 세포사멸조절인자 검색방법(대장균 BL21/pET28a-E7를 이용)

자궁경부암 항암제 및 세포사멸조절인자 검색방법에 대한 것으로, 대장균 BL21/pET28a-E7 KCTC 18016P에서 GST 및 His-융합형으로 발현 되는 사람 파필로마바이러스 16형 E7 재조합 단백질을 글루타치온 비드 및 니켈비드로 신속하게 정제하여, 대장균에서 생산된 사람 암 억제 인자 Rb의 가용성 분획과 반응시켜 그 결합능을 웨스턴 블럿법과 엘라 이자법으로 확인함으로써 E7-Rb in vitro 결합용 검색방법을 제공하고, 상기 검색방법을 통하여 항암제 및 세포사멸조절인자의 검색과 개발 및 스크리닝에 이용할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.본 발명은 인체 자궁경부암을 유발하는 사람 파필로마바이러스 16형의 E7 단백질을 Histidine 융합 단백질의 형태로 고 발현시킬 수 있는 대장균주를 이용하여, 가용성 His-사람 파필로마 바이러스 16형 E7 융합단백질은 니켈 비드를 이용하여 정제한 후, 암억제유전자 Rb의 가용성 분획간의 결합이in vitro 결합능 검색 시스템을 수립하였음, 이로써 E7-Rb결합을 경쟁적으로 저해할 수 있는 합성펩타이드들의 선별 및 변형과, 세포사멸조절인자 및, E6-p53 결합구조에 기초하여 디자인된 합성 제약의 개발을 위한 스크리닝 기술을 수립함.