일반기술

신규한 플라스미드 pKLE와 이를 이용한 리파아제의 대량생산방법

본 발명은 신규한 플라스미드 pKLE와 이를 이용한 리파제의 대량생산방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 유전자 조작에 의해 제조된 신규한 재조합 벡터 pKLE을 이용하여 알카리 및 단백질 분해효소에 대한 내성이 강하고 용매안정성이 우수한 리파제를 대장균 세포내에서다량 발현시키고 이를 활성이 있는 안정된 형태로 고수율로 분리정제하여 제조하는 방법에 관한 것이다. 리파제는 상쇄 지방산을 갖고 이는 트리플리세라이드를 가수분해하여 디글리세라이드, 모노글리세라이드, 글리세롤 및 지방산 등으로 만드는 효소로서, 식품, 화학 및 피혁 가공산업 등에서 널리 이용 되고 있다.본 발명은 리파제를 코우드하는 플라스미드 pKLE에 의해 E. coil에 형질전환된 신균주 BL21(DE3)/pKLE에 관한 것이고, 상기 신균주 BL21(DE3)/pKLE를 배양시켜서 생성된 리파제 코우드로된 재조합 단백질을 세포추출물로부터 분리하여 리파제 활성이 있는 형태로 전환시키고 정제하는 리파제를 제조하는 방법에 관한 것도 포함한다. 그리고, 본 발명은 리파제가 대장균에서 발현되도록 연결된 DNA 서열을 함유하는 플라스미드 pKLE에 관한 것도 포함한다. 더욱 상세하는 본 발명은 유전자 조작에 의해 프로테우스 불가리스 K80의 cDNA로부터 새로운 재조합 DNA 발현벡터를 제조하고, 이로부터 신규한 재조합 플라스미드 pKLE를 제조한 다음, 이를 대장균에 형질전환시키고 배양하여 이로부터 리파제를 생산하도록 함으로써 정제된 리파제를 대량으로 생산하는 방법에 관한 것이다.