일반기술

Super Bac1- 이동 능력을 가진 유도(inducible) 벡터(Vector)

본 기술은 유전적 연구에 보편적으로 이용되는 BAC vector의 한계점을 보완하여 몇가지의 유전자, oriV, oriT, rep60를 삽입시켜 새로운 벡터를 제작하는 기술이다. BACs(bacterial aritificial chromosome)는 유전적으로 그리고 genomic DNA library 분석을 위해 보편적으로 이용되는 벡터(vector)로, 큰 크기의 DNA 삽입물로부터 많은 생성물을 계속적으로 만들도록 해야하므로, 이 벡터의 이용에 조금의 한계점을 보인다. BACs은 세포내에서 적은 복제 수로 존재하며 까다로운 분석 후에 충분한 DNA를 분리하여 만들어진다. 게다가, BAC내 삽입물로부터 주요 유전자들의 발현은 발현 연구에 전형적으로 이용되는 숙주인, E. coli의 생화학적 환경에 의해 억제될 수도 있다. 이에 한층 진보한 BAC 벡터(vector)인 Super BAC 1 벡터가 현재 개발되었으며, 유전적 연구에 이용된다. 또한, IncP plasmid RK2에 oriV 유전자가 포함되도록 BAC를 부분적으로 변경하여 이용하였다. arabinose-inducible replication을 제공한 특이적 전사 인자, oriV 유전자는 BAC에서 생산하는 arabinose수의 50에서 150배 증가하여 생성된다. 두 번째의 변경은 plasmid RK2에 oriT 유전자가 삽입된 BAC이다. tra 유전자는 Bacillus의 암수 결합때 이동하는 능력을 제공하는 것으로 이 유전자를 E. coli내로 삽입했다. Bacillus내로 옮긴 BAC이 존재하도록 Bacillus 플라스미드로부터 rep60 유전자을 포함시켰다. Bacillus에 특이적으로 존재하는 복제부위에서는 세포당 5-6개의 복제수를 가지도록 만들었다.Super BAC 1는 적은 복제수에서도 큰 게놈 단편들을 안정적으로 유지시킬 뿐아니라 염기 서열 분석과 클로닝 그리고 다른 기술을 위해 적은 복제수의 BACs의 분리와 함께 arabinose 의 증가를 위해 삽입물의 증폭을 50-150배가 되도록 제공한다. 발현 연구에서는 증폭되는 BAC 벡터가 새로운 화학 물질들의 발견에 이용될 것이며 적은 복제수 BAC으로 검출되지 않은 것에 대한 확인에 이용한다. 운반 능력을 가짐으로 E. coli에서 관찰되지 않는 새로운 표현형의 동정에 이용된다