일반기술

게놈 내로 외부 핵산(Nucleic Acids)의 효과적인 삽입

최근에 생체 내에서 Tn5 돌연변이 형성은 무작위적으로 또는 어느 정도의 무작위적인 위치들에서 게놈 내로 핵산을 삽입시키는데 이용된다. 그러나 이 기술은 잔기의 전위에서 나타나는 암호화하는 transposase을 위한 표적 세포를 요구하며 각각의 표적 세포종에 대한 광범위한 정보를 필요로 한다. 그러나 이 기술은 잔기의 치환에서 보이는 transposase 효소의 암호를 위해 표적 세포를필요로 하며, 각 표적 세포 형태의 정보는 널리 알려져있다. 본 기술은 생산력이 있는 치환으로부터 synaptic 구조의 방해 또는 적당치 않는 조건하에서 그리고, 생체내에서 transposase와 중요한 폴리펩타이드 염기 서열 사이의 synaptic 구조의 생성을 위한 방법으로 제공됨으로써 이들 한계점을 극복한다. 치환 가능한DNA는 되도록 직선형으로 치환을 위한 반복되는 염기 서열을 포함하고 있다. 이들 복합체들은 생산력을 가진 치환 생성물의 생성을 위해 세포의 핵산내로 치환하는 것보다 표적 세포내 폴리펩타이드에로 치환되도록 한다. 삽입으로 생긴 돌연변이를 가진 세포의 라이브러리는 치환된 세포의 확인을 위한 알맞은 선발 지표(즉 항생제의 저항성)을 이용하여 찾아 낼 수 있다. 이전에 synaptic 복합체는 세포에서 표적 핵산이 존재할 경우에 치환 촉진 조건에서 효과적으로 작용할 수 있었다. 이 기술은 새롭게 시약을 위해 이용 될 수 있다.- 치환 가능한 폴리펩타이드 염기 서열과 표적 세포로 구성되어있는 이 재료 세트는 조립할 수 있다. - 세포내 transposase 분자 (Tn5 transposase 또는 MuAtransposase등등)에 의존하지 않는다.- flanking donor DNA로부터 비특이적인 내부 분자의 치환은 피한다. - 숙주 비특이적으로 진핵세포 또는 원핵세포에서 이용되는 기술이다. - 이 기술은 다루기 쉬우며 폴리펩타이드 염기서열 사이의 어떠한핵산 절편을 위해서도 제한성이 없으며 다양한 synaptic 복합체의 생산력을 조절한다.