일반기술

복제와 전사를 이중으로 조절하는 발현 벡터(expression Vector)

많은 재 조합 단백질들의 생성을 위한 많은 다량 복제벡터는 유전자 발현이 확실하게 조절되지 않으므로 종종 숙주에 대해 독성과 불안정성을 가질 수 있다. Bacterial artificial chromosomes (BACs)벡터는 이들 단일 복제 벡터가 다수의 복제벡터에 비해 더 안정하므로 제노믹에 널리 이용되며 거대 삽입물의 생성을 유지할 수 있다. 그러나 단일 복제 발현 시스템은 DNA양이 매우 적다.본 기술은 BAC 발현 시스템의 조절로 제노믹 폴리 펩타이드의 유도로 많은 양을 생산할 수 있다. 변경된 pBAC 시스템은 광범위하게 숙주에서 이용되는 제한적으로 증폭 가능한 복제 원점(oriV)을 포함하며 확실한 조절과 이식 유전자와 연관된 전사 프로모터를 촉진한다. 제한적인 oriV 과 촉진 프로모터는 숙주 세포에서 신호에 의해 동반적으로 혹은 독립적으로 활성화된다. 특히, BAC 벡터의 복제 수는 단일로 유도된 단백질과 oriV로부터 복제를 유도하는 TrfA에 의해 조절된다. 유전자 전사는 삽입된 유전자의 많은 수의 복제를 유도할 수 있는 arabinose 유도 프로모터에 의해 조절된다. 따라서 이 pBAC 벡터는 폴리펩타이드의 다량 전사를 위해 필요한 모든 인자들을 조정한다.- 변경된 BAC 벡터는 전사 수준과 복제 수 모두를 조절하는데 이용- 유전자 발현을 확실하게 조절하기 위해 이용- 재개발된 BAC 벡터는 클로닝된 DNA의 증폭을 담당- 클로닝된 유전자의 생성물들은 독성이 적은 상태로 생성된다. - arabinose의 유도는 삽입된 유전자의 복제 수를 1에서 100배정도로 증가시킬 수 있다.- 거대 핵산 삽입물들을 조절할 수 있다