일반기술

방향족 함유 계면활성제에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질

본 기술은 `방향족 함유 계면활성제에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질`에 관한 것으로서, 단백질이 유도되는 조건 및 이 조건으로 유도된 단백질에 관한 것이다. 본 기술에 따른 `방향족 함유 계면활성제에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질`은 진핵 미생물군인 Candida tropicalis HJ101로 부터 방향족 함유 계면활성제에 의해 특이적으로 유도되는 단백질을 대량으로 유도시킨 후, 유도된 단백질을 검출 및 정제하여 얻어지는 단백질 프로브이다. 본 기술의 단백질의 유도조건 및 정제방법으로 나누어 진다. 1.유도조건 : 미생물 배양용 배지에 방향족 함유 계면활성제를 50mg/L 이상 첨가시켜 특정 진핵 미생물을 접종시킨 후 약 24시간 이상(대수 기 말기) 배양하거나, 500mg/L이상 농도의 계면활성제를 함유한 배양액 에 전배양을 통하여 균체수를 늘린(109 이상함유) 미생물을 약 2시간이 상 반응시켜 단백질을 유도시킨다. 2.단백질 확인 : (1) 전기영동장치에 의한 확인`방향족 함유 계면활성제 에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질`은 균체파쇄액을 전기영동장치 를 이용하여 SDS PAGE(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel eletrophoresis)와 Native PAGE로 확인한다.전기영동 장치로 확인된 `방향족 함유 계면활성제에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질`의 크 기는 SDS page에서 47.9kD, Native PAGE에서 약 105kD으로 확인되었다. 이 결과로부터 `방향족 함유 계면활성제에 의해서 특이적으로 유도되 는 단백질`은 이량체로 판명되었다.(2) 생리활성에 의한 확인`방향족 함유 계면활성제에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질`이 존재하면 발 색하는 특수한 물질을 이용하면 Native PAGE상에서 서로 반응하여 특정 한 부위에 발색 band를 형성한다. 이 발색 band가 방향족 함유 계면활 성제에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질이다. 3. 정제 : `방향족 함유 계면활성제에 의해서 특이적으로 유도되는 단백 질`을 다량으로 유도할 수 있는 조건으로 배양한 균체를 회수한 후, 파 쇄하여 원심분리, 초원심분리를 거처 균체파쇄액을 제조한 후, 겔 여과 법, ion교환수지법 등을 이용하여 최종적으로 `방향족 함유 계면활성제 에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질`을 얻는다. 이렇게 하여 얻어 진 `방향족 함유 계면활성제에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질`은 용도에 따라 in suit 검색 kit의 프로브, 모니터링 시스템의 protein chip 프로브로서 사용할 수 있다.- 전기영동 장치로 확인된 `방향족 함유 계면활성제에 의해서 특이적으로 유도되는 단백질`은 크기가 SDS page에서 47.9kD, Native PAGE에서 약 105kD으로 된 이량체 단백질로서, 이온성과는 관계없이 방향족을 함유한 계면활성제에 의해 특이적으로 유도되는 특성을 가짐- 계면활성제 존재유무 및 농도를 파악할 필요성이 있는 폐수처리장 등에서 사용하여 오던 기존의 기기분석을 통한 검출방법과 비교하여 손쉽고 빨리 검출할 수 있어, 시간과 경비를 절감할 수 있는 방향족 함유 계면활성제 검출용 kit개발을 위한 단백질 프로브로서 제공할 수 있음