일반기술

균주개발, 대량생산기술, 살충력 검증

기존 화학합성 농약의 심각한 폐해로 새로운 개념의 농약 개발이 시급한 실정임. 무공해 농약중 미생물 살충제의 생산기술개발에 관한 연구를 수행함. 플라즈미드의 안정성을 향상시키기 위하여 항생제 투여 없이 100% 안정한 재조합 대장균 균주를 개발 중에 있음. Btt toxin 의 생산을 위한 재조합 대장균의 숙주세포로 XL1-Blue가 가장 좋았음. 안정화를 위한 hok/sok system은 대장균에서 plasmid를 110 generation 동안 100% 안정하게 하였음. 본 연구에서 사용된 재조합 살충단백질은 온도 유도에 의해 생산됨. Btt toxin gene의 발현은 induction시작한지 한 시간 이내에 시작됨. 복합질소원으로 yeast extract를 첨가했을 때 0.5g/L의 생산성을 보였음. 배양온도에 따른 최적 배양시간은 30℃에서 7시간, 42℃에서 5-8시간 정도였음. 최적 pH는 6.5 였고, 아미노산의 적정 농도는 threonine, leucine, tryptophan의 경우 각각 0.1, 0.1, 0.01g/L 였음. 미생물 살충제 피막화를 위한 연구로서 전분입자를 평면에 접착시키고 이를 건조하였을 때 접착력이 증가됨을 관찰함. 건조된 전분입자의 접착력은 수중에서 시간이 지남에 따라 감소함. Biotest결과 본 재조합 대장균에 의해 생산된 살충단백질이 원래 Btt 균주에 의해 생산된 살충단백질과 같은 수준의 살충력을 지님이 밝혀졌음. 총 단백질 농도가 0.02g/L으로 낮을 때에도 4일 후 100% 치사율을 기록함.