일반기술

메타놀자화 효모를 이용한 재조합 단백질 최적발현 시스템 개발

효율적인 재조합 hEGF 생산 system 개발을 위하여 몇 가지 균주중에서 메타놀에 대한 저항성이 높은 외래 유전자 발현 효율이 높은 H. polymorpha DL -1 균주를 선별하여 동 균주를 이용한 발현 system 개량을 위해서 DL-1 균주로부터 multicopy integration을 유도하는 신규 HARS 유전자를 cloning 하고 형질전환효율 및 외래유전자 도입효율이 상대적으로 높은 HARS36을 선별하였다.외래 단백질의 발현 system 의 개량을 위해서 H.polymorpha DL-1 유래의 몇 가지 강력한 발현 promoter를 확보하여 특성분석이 진행되었으며 다목적 재조합 단백질 생산을 위한 vector 들을 다량 확보하였다.또 하나 효모를 이용한 외래단백질의 생산량잉 한계가 주로 분비능력에 기인하는 경우가 많기 때문에 이러한 분비능이 약 2-10배까지 향상된 균주를 확보하였다.고효율 재조합 hEGF 생산 균주 확보를 위해서 다양한 방법을 이용하여 hEGF 발현 카세트의 도입을 시도한 바 H.polymorpha 의 uracil 영양요구성을 slow complement 할 것으로 예상되는 Sc-URA3 을 이용한 형질전환에서 비교적 용이하게 고효율 재조합 hEGF 생산균주를 확보할 수 있었고 이 균주의 재조합 hEGF 생산성은 기존의 대조구에 비해 약 15배 이상이 증가되어 약 0.5 g/L 의 재조합 hEGF 를 최적화되지 않은 flask배양에서 얻을 수 있었다. 이러한 생산성은 향후 발효조를 이용한 배양최적화 연구를 통하면 더욱 증가될 수 있을 것으로 사료된다.