일반기술

슈도모나스 세파시아 BY21 균주와 이로부터 글루타릴세븐에이씨에이 아실레이즈 생산방법

본 발명은 신규한 슈도모나스 세파시아 BY21(Pseudomonas cepacia BY21)균주와 이로부터 생산된 글루타릴세븐에이씨에이 아실레이스(glutaryl-7ACA acylase)효소에 관한 것으로 토양으로부터 모델기질(GNA)에 의한 발색반응으로 선별한 토양시료액을 LB 배지에 도말하여 순수 균주를 분리한 후 분리한 각 균주를 배양한 후 배양액을 TLC 및 HPLC 분석하여 글루타릴세븐에이씨에이 아실레이즈(glutaryl-7ACA acylase) 효소활성을 확인한 다음 토양균주중에서 효소활성이 가장 우수한 슈도모나스 세파시아 BY21를 최종적으로 선별하였고 선별한 본 발명 슈도모나스 세파시아 BY21 균주는 glutaryl-7ACA 아실레이즈 효소를 대량으로 생산하며 생산된 glutaryl-7ACA 아실레이즈 효소는 반합성 세파계 항생제의 출발물질인 세븐에이씨에이(7-ACA)를 효소공급에 의해 경제적이면서 환경오염없이 생산하는 뛰어난 효과가 있다.본 발명은 토양시료중 모델기질(GNA)에 의해 발색반응을 나타내는 시료를 선별하여 LB배지에서 배영시킨 후 성장한 콜로니를 선별하는 단계; 상기 선별한 균주를 기질인 glutaryl-7ACA와 반응 시킨 반응액을 TLC 플레이트에 전개시키거나 u-Bandpak C18 칼럼을 사용한 HPLC로 분석하여 7-ACA 밴드를 확인하고 이 균주를 슈도모나스 세파시아 BY2 Pseudomonas cepacia BY21)로 명명하는 단계; 상기 슈도모나스 세파시아 BY21균주를 배양한 세포추출액을 투석 및 정제한 후 최적 pH와 온도를 조사하는 단계 및; 본 발명 슈도모나스 세파시아 BY21 군주를 기질인 glutaryl-7ACA와 혼합하여 7-ACA를 생성하는 단계로 구성된다