일반기술

양계산업에서 피부병치료약(항체)개발 및 신물질 생산에 의한 산업 안정화

C. tropicalis 배양방법 먼저 108배지에 균을 활성화시킨다. 실온에 방치하여 1일 후에 흰색의 colony 들이 관찰됨. 직경 2mm이상됨. 108 agar 배지에서 활성화된 균을 1 loop을 5ml broth tube에 접종하여 정치시켜서 배양함. 실온에서 배양 1일 후에 5ml broth tube에 밑바닥에 균이 성장한 것을 관찰함. 잘 흔들어서 500ml broth에 접종하였다. 배양은 2일간 배양(48시간), 회전배양을 30 C로 조절하고 200rpm으로 회전시켰다. C. tropicalis 항원제작 48시간 배양이 끝난 후에 formalin으로 3시간 동안 처리하였다. broth total volume이 50ml, 37% formalin을 6.85ml를 첨가, 그러면 total volume에 0.5% formalin을 첨가한 결과가 됨. 3시간 후에 formalin을 첨가한 것과 정상균주를 108 agar plate 에 접종하여 균이 완전히 사멸되었는가 검사. 실제로 포르말린 첨가된 효모는 agar plate에 성장하지 않음. 역시 30 C에서 200rpm으로 회전시켰다. 50ml conical tube에 40ml씩 분주하여 3000rpm에서 30분간 원심하였다. 상충액을 버린다. PBS(pH7.4)로 재부유시킨 후 다시 3000rpm에서 30분간 원심하는 방법으로 2회 세척하였다. 2회 PBS 세척 후에 pellet의 무게를 측정함. 백신제작 PBS 6.3ml + 항원 (100mg/ml) 0.7ml; 10mg/ml을 되게 했음. Freund's complete adjuvant 7ml 유리 주사기로 잘 혼합. (아쥬반트에 혼합할때 소실양이 많으므로 여유있게 만듬) 2ml을 암탉의 흉근에 접종함. 접종할 때 양쪽 흉근에 나누어서 1ml씩 접종함. 달걀은 접종하기 전에 얻은 것을 냉장보관 채혈은 접종하기 전에 실시. 남은 백신은 -20C에 보관함 위의 실험방법을 이용하여 얻어진 백신을 4회 접종하여 항원을 포함한 수정란을 얻어냄