일반기술

농산물중 유해잔류물질의 모니터링 시스템 개발 (곰팡이독소를 중심으로)

농산물중 유해잔류물질 모니토링 시스템을 곰팡이독소(mycotoxin)를 중심으로 개발하기 위한 실험을 행하였다. 금년도 실험에서는 mycotoxin중 T-2 toxin, zearalenone 그리고 ochratoxin에 대한 단크론성항체를 생산하는 hybridoma cell line을 개발하기위해 우선 분자량이 적어 항원성이 결핍된 mycotoxin을 단백질과 인위적으로 결합시켜 분자량을 증폭시키는 실험을 행하였다. 그 결과 T-2 toxin으로부터 T-2 toxin-hemiglutarate(HG)-bovine serum albumine(BSA) conjugate를, zearalenone은 zearalenone-oxime-BSA conjugate를, 그리고 ochratoxin으로 부터는 ochratoxin-BSA conjugate를 각각 합성하였고, 이들을 TLC, GC 및 HPLC등으로 확인하였다. 이들 mycotoxin-protein conjugate를 항원으로 BALB/C mouse에 면역시키고 해당 mycotoxin에 역가를 보인 혈청을 생산하는 mouse의 spleen cell을 적출하여 cell fusion을 행하였다.이때 mouse 의 항혈청titer검정을 위해 T-2 toxin과 ochratoxin은 indirect competitive ELISA법을 zearalenone은 sandwich competitive ELISA법을 확립하였다. cell fusion후 mycotoxin 에 특이한 항체를 계속적으로 생산하는 hybrid를 cloning하였다.그결과 zearalenone에 대한 단크론성 항체를 생산하는 hybridoma cell을 5주,ochratoxin에 대해서는 2주를 개발했으나,T-2 toxin에 대해서는 아직도 cloning를 계속하고 있다.확보된 cell line을 BALB/C mouse복강에 주사하여 mycotoxin에 대한 항체생산을 실험한 결과 zearalenone에 대한 hybridoma(Z-2-M26)의 경우 1:100,000에서 양성반응을 보인 zearalenone에 특이한 항체를 생산하였고, ochratoxin에 대한 hybridoma(O-18-M39)의 경우 1:50,000까지 양성반응을 보이는 ochratoxin에 특이한 항체를 생산하였다.