일반기술

다중점 중합연쇄반응

multispot PCR에서는 먼저 서로 다른 프라이머들을 polymerase와 함께 PCR 칩표면에 스팟하면 칩위에 unspecific하게 붙게 된다. 두 번째 단계로 샘플 용액을 칩에 첨가 하게 되는데 이때에 단일 샘플 방울은 단지 하나의 스팟이나 스팟숫자로 정해진 하나의 well에 덮는다. 이 작은 방울들은 샘플을 pipetting하거나 표면 음파를 이용하여 형성된다. 세 번째 단계는 프라이머가 표면음파나 대류에 의해 용해되고 마침내 모든 방울들이 미네랄 오일로 덮이고 그 결과로서 PCR 프로토콜은 모든 스팟들이 독립적으로 그러나 병렬적으로 수행된다. 이러한 접근은 많은 양의 inhomogeneous assay(DNA 혼성화, ELISAs)에서 homogeneous assay 에 이르기까지 많은 수의 transformation을 가능하게 한다. PCR칩은 히터와 온도 센서가 붙어있어서 실시간 PCR에 이용할 수 있고 DNA microarray와 비교할 때 보존 기간을 가지고 있다.기존의 일반적인 PCR과는 다르게 multiplex PCR은 서로 다른 여러개의 프라이머를 이용함으로 많은 수의 개별적으로 진행되는 PCR을 한꺼번에 수행할 수 있으며, 상당한 시간과 가격면에서 경제적인 이득을 주고 샘플 수 또한 줄일 수 있기 때문에 샘플이 한정적일때 multiplex PCR은 아주 유용한 방법이다. 그러나 이러한 multiplex PCR은 최적화가 매우 어렵기 때문에 확실한 assay를 개발하기 위해 프라이머를 온도 프로토콜의 변화와 연관하여 디자인 하는데 많은 시간과 노력이 필요 했었다. multispot PCR은 multiplex PCR의 다른 접근 방식으로 일반적인 PCR의 장점과 multiplex PCR 간단한 조작법을 결합한 것이다.