일반기술

세포침투성 티에이티-사이토신 디아미네이즈 융합단백질 및 그 용도

본 발명은 유전자 유도 효소/프로드럭 치료법(gene directed enzyme/prodrug therapy; GDEPT)에서 중요한 역할을 수행하는 것으로 알려진 사이토신 디아미네이즈(CD)를 세포 내로 운반하고 세포 내에서 활성을 가지도록 하기 위하여 HIV-1 Tat 단백질과 융합시킨 융합단백질 Tat-CD, 이 융합단백질 Tat-CD를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드, 이 융합단백질을 제조하는 벡터 및 이 융합단백질을 세포 내로 도입시키는 방법 및 그 용도에 관한 것으로서, Tat-CD 융합단백질은 의약 조성물 등의 용도로 유용하다. 본 발명에서는 세포감염(transfection)에 의한 유전자 유도 효소/프로드럭 치료법(GDEPT)의 문제점을 극복하기 위해서 단백질 형질도입부위를 이용하여 세포 안으로 CD 효소를 직접 도입(transduction)시키는 방법(PTD-DEPT)을 개발하였으며, Tat-CD 융합효소를 도입하는 것에 의해 부작용 없이 항암효과를 나타내는 단백질 또는 치료법을 제공한다. PTD-DEPT를 증명하기 위한 방법으로서 CD 유전자들은 Tat의 9개 아미노산 (RKKRQRRR)과 융합되었고, 대장균 발현벡터에 클로닝 되었으며, 융합단백질을 순수하게 정제하여 융합 단백질을 HeLa 세포에 도입하였다.