일반기술

체세포 복제동물의 생산을 위한 세포융합 방법

본 기술은 복제동물의 생산방법에 이용될 수 있는 융합세포의 활성화 방법에 관한 것으로서 동물의 신체조직의 일부로부터 채취한 체세포를 공여핵세포로 이용하여 융합시킨 세포를 활성화시킴으로써, 핵이식 기술에 의해서 복제된 동물, 예컨대 복제된 소를 생산할 수 있도록 하는 방법에 관한 것이다. 본 기술은 소의 체외수정 및 체외배양에 의해 얻어진 수정란 또는 소의 체세포를 채취하여 세정 및 분주처리조건하에 보관하는 단계, 소 신체의 다양한 조직으로부터 세포주를 분리하여 보존하는 단계, 성숙난자의 투명대의 일부를 절개하고 세포질의 10 내지 30%의 탈핵을 실시하는 단계, 공여세포를 핵이 탈핵된 난자에 이식하는 단계, 이식 및 밀착된 세포를 DC 조건의 전압으로 전기융합시키는 단계, 융합된 세포를 배지내에서 활성화시키는 단계 및 활성화된 세포를 후활성화 및 검란한 후, 미소적 배지내에서 배양시키는 단계를 포함하는 복제동물의 생산방법에 이용되는 세포융합방법에 관한 것으로서, 본 기술의 방법은 이식 및 밀착된 세포를 DC 조건의 전압으로 전기융합시키는 단계에서 DC 조건의 전압의 경우 0.75∼2.25kv/cm으로 1∼2회에 걸쳐 회수×시간이 총 60㎲ 이내로 되도록 조정하여 전기 융합(electrofusion)을 실시하는 것을 특징으로 한다.