일반기술

체세포 복제동물 생산을 위한 융합세포의 활성화 방법

본 기술은 복제동물의 생산방법에 이용될 수 있는 융합세포의 활성화 방법에 관한 것으로서 동물의 신체조직의 일부로부터 채취한 체세포를 공여핵세포로 이용하여 융합시킨 세포를 활성화시킴으로써, 핵이식 기술에 의해서 복제된 동물, 예컨대 복제된 소를 생산할 수 있도록 하는 방법에 관한 것이다. 본 기술의 융합세포 활성화 방법은 도축난소로부터 미성숙난자를 채취, 배양하는 단계, 소 신체의 다양한 조직으로부터 세포주를 분리하여 보존하는 단계, 준비된 성숙난자의 투명대의 일부를 절개하고 세포질의 10∼30%를 제거하여 탈핵을 실시하는 단계, 공여세포를 탈핵된 난자에 이식하는 단계, 이식 및 밀착시킨 작성란을 DC 조건의 전압으로 전기융합시키는 단계, 융합된 세포를 융합과 동시에 혹은 약물을 첨가한 배지내에서 활성화시키는 단계 및 활성화된 세포를 후활성화 및 미소적 배지내에서 배양시키는 단계를 포함하는 복제된 소의 생산방법에 있어서,융합된 세포를 융합과 동시에 혹은 약물을 첨가한 배지내에서 활성화시키는 단계에서 융합과 동시에 일렉트로퓨젼 방법으로 활성화를 유도하는 경우에는 Ca2+ 첨가 융합배지내에서 일렉트로퓨젼을 실시하고, 이노마이신(Ionomycin) 처리법으로 활성화를 유도하는 경우에는, 차광조건하에 50㎕점적내에서 4분간 정치하고, 35mm 디쉬내에 10% FBS 혹은 30mg/ml BSA가 첨가된 세정용 매질하에서 이노마이신을 제거한 뒤 5분간 정치시킨다. 또한, 시클로헥시미드(Cycloheximide) 25㎕점적 내에 5-10개의 작성란을 침지하여 6시간 배양하거나, DMAP 25㎕점적 내에 5-10개의 작성란을 침지하여 4시간 배양시킴으로써 후활성화 단계를 포함한다. 체세포 복제 성공률을 향상시킬 수 있는 체세포와 탈핵 난자를 융합시킨 후 활성화시키는 방법에 관한 것으로 다양한 체세포 복제 분야에 응용적용이 가능하다.