일반기술

포스포리파제C감마1동위효소와단백질상호간결합효율의정량적분석방법

본 기술은 세포내의 신호전달 물질인 포스포리파아제 C 감마 1(phospholipase C-γ1) 동위효소에 의한 신호전달 과정에서 이와 결합하는 단백질 상호간의 결합 효율을 엘라이자 (ELISA: Enzyme Linked Immunosorbent Assay)를 통해 정량적으로 분석하는 방법에 관한 것이다. GST fusion 형태의 결합단백질을 ELISA plate에 coating 되어 있는 PLC-γ 1과 반응시키고 항 GST항체를 이용하여 결합된 단백질을 확인함으로서 두 단백질 상호간의 결합정도를 단백질이 변성 되지 않은 상태에서 정량적으로 분석할 수 있다. 이 기술을 이용하여 발암과정에 중요한 역할을 할 것으로 생각되는 PLC-γ 1과 결합하는 단백질의 상호 친화돌르 in vitro 조건에서 정량적으로 측정할 수 있으며, 이러한 상호 작용에 의해 잇아현상이 발생할 때 이를 저해할 수 있는 저해제를 개발하여 이의 효과를 정량적으로 확인할 수 있다.1. 적은 양의 다양한 시료들을 대량으로 매우 짧은 시간 내에 분석할 수 있다. 2. GST를 결합시킨 재조합 단백질을 제조, 단백질간의 결합에 이용하기 때문에 단백질 상호간의 결합에 대한 방해 없이 분석이 가능하다. 3. 각 단백질에 대한 항체의 존재유무에 관계없이 결합 단백질 공통으로 항 GST 항체를 이용하여 결합 여부를 확인 할 수 있다.