일반기술

카스파제-3에 대한 안티센스 뉴클레오타이드, 그의 발현 벡터 및 이를 이용한 세포예정사의 억제방법

B형 간염 바이러스의 S 표면 항원에 대한 인간화된 항체를 생산하는 재조합 CHO 세포의 apoptosis를 억제하기 위하여 caspase-3에 대한 antisense RNA를 encoding하는 발현 vector를 도입하였다. Subcloning과 Western blotting을 이용하여 caspase-3의 발현량이 줄어든 세포를 확보하고 다양한 농도의 sodium butyrate가 첨가된 배지를 사용하여 회분배양을 실시하였다. Antisense RNA의 발현으로 sodium butyrate에 의한 apoptosis를 억제하였지만 항체의 생산은 증가하지 않았다. 그러나 세포막의 integrity를 유지시켜줌으로써 생산된 생산 단백질의 질을 향상시킬 수 있을 것으로 여겨진다.본 기술은 동물세포 배양 과정에서 생산된 단백질의 질에 나쁜 영향을 미치는 apoptosis를 억제하기 위해 Bcl-2 단백질과 같은 oncogenic 성질을 갖는 생존 단백질을 사용하지 않고 apoptosis의 마지막 단계에 작용하는 caspase-3 단백질 분해 효소에 대한 antisense RNA를 세포내에서 직접 유도으로써 caspase-3의 발현을 억제함과 동시에 생존단백질을 사용함으로써 발생할 수 있는 regulatory 문제를 해결할 수 있다는데 그 특징이 있다.