일반기술

루미노코쿠스알부스유래의베타-글루코시다제유전자

본 발명은 루미노코쿠스 알부스(Ruminococcus albus) 유래의 베타-글루코시다제 유전자의 염기서열을 결정하고 이를 함유하는 발현벡터로 형질전환된 형질전환체를 배양하는 유전공학 기법을 이용하여 베타-글루코시다제 효소를 대량 생산하는 방법에 관한 것으로 루미노코쿠스 알부스의 염색체 DNA를 제한효소로 절단하여 DNA 라이브러리를 제조한 후 이 DNA 라이브러리로부터 얻은 적정 크기의 DNA 단편을 pUC19 벡터에 삽입하고 이 벡터로 대장균을 형질전환시킨 후 배양하여 베타-글루코시다제 유전자를 클로닝하고 상기 클로닝한 베타-글루코시다제 유전자를 지닌 E.coli 형질전환체를 선별한 다음 배양하고 이 배양액의 베타-글루코시다제 효소 활성을 측정하여 베타-글루코시다제 효소 발현을 확인하므로써 루미노코쿠스 알부스의 베타-글루코시다제 유전자가 도입되어 형질전환된 대장균 배양에 의해 베타-글루코시다제 효소를 대량 생산할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.본 발명은 하기 서열의 베타-글루코시다제 유전자를 포함하는 재조합 벡터 pBG1이 도입된 형질전환체(기탁번호 KCTC 8613P)를 배양함을 특징으로 하는 베타-글루코시다제의 생산방법으로 루미노코 알부스 유래의 베타-글루코시다제 유전자와 이를 함유하고 있는 발현벡터 및 그 형질전환체에 관한 것이다. 즉, 베타-글루코시다제 유전자의 염기서열과 이를 함유하는 발현벡터로 형질전환된 형질전환체를 배양하여 베타-글루코시다제 효소를 대량생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명으로 루미노코쿠스 알부스의 염색체 DNA를 제한효소로 절단하여 DNA라이브러리를 제조한 후 이 DNA라이브러리로 부터 얻은 적정 크기의 DNA단편을 pUC19벡터에 삽입하고 이 벡터로 대장균을 형질전환시킨 후 배양하여 베타-글루코시다제 유전자를 클로닝하고 상기 베타-글루코시다제 유전자를 지닌 E.coil형질전환체를 선별한 다음 배양하고 이 배양액의 베타-글루콧히다제 효소 활성을 측정하여 베타-글루코시다제 효소 발현을 확인하고 루미노코쿠스 알부스 7균주와 베타-글루코시다제 유전자가 도입된 형질전환체가 생산하는 각각의 효소활성을 측정하여 비교함으로써 달성하게 된다.