일반기술

고초균유래엔도자일라나제의신호서열유전자를포함한재조합플라스미드및그를 이용한외래단백질의제조방법

본 발명은 고초균(Bacillus subtilis) 유래 엔도자일라나제(endoxylanase)의 분비 신호서열(secretion signal sequence) 유전자를 포함한 재조합 플라스미드 및 전기 플라스미드에 원하는 외래 단백질의 유전자를 삽입하고 그를 대장균에 도입하여 형질전환체를 배양하고 발현을 유도함으로써, 재조합 대장균의 세포질 밖으로 효율적으로 분비된 외래 단백질의 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 다양한 재조합 단백질을 대장균의 주변세포질로 분비 생산하는 방식에 관한 내용으로, 본 발명의 분비 신호 서열을 사용하면 기존의 대장균 세포내에 불용성 응집체 형태로 생산하는 방식에 비해 재조합 단백질을 분비 생산함으로써 다양한 재조합 단백질을 효율적인 방법으로 분리정제가 가능하다.대장균을 이용하여 산업적 의학적 부가가치가 매우 높은 다양한 인체 유래 재조합 단백질의 시장규모는 앞으로도 점차 기하급수적으로 성장한다고 전망되며, 본 기술을 이용하여 다양한 재조합 단백질의 대량 생산은 기존의 다양한 생산방법에 비해 분비 정제 등과 같은 여러 가지 장점을 가지고 효율적인 생산이 가능하기 때문에 다양한 바이오 관련 회사들의 제품의 산업화에 대한 활용도는 매우 클 것을 기대된다. 지금까지 대장균에서 외래 단백질의 분비생산에 이용된 다양한 분비 신호 서열 보다 높은 분비능을 갖는 새로운 분비 신호 서열을 이용하여 외래 단백질을 분비 생산하였다. 본 발명은 새로운 분비 신호 서열과 분비코자 하는 단백질 사이에 링커(linker) 없이 바로 연결하여 분비 생산하는 단백질이 주변 세포질에 soluble 형태이면서 Met extension 혹은 추가적인 아미노산 없이 원래의 재조합 단백질을 높은 효율로 생산할 수 있는 장점을 가졌다. 따라서 기존의 프로세스로 생산하기 어려운 다양한 재조합 단백질을 효율적으로 생산할 수 있으며, 다양한 재조합 단백질 관련 바이오 관련 회사들이 본 발명을 이용할 수 있을 것이다.