일반기술

용혈 작용을 하는 물질 실험 방법

유해한 조류들은 바다를 오염시키고 바다 생물과 인간들 또한 먹이 사슬에서 또는 직접적으로 독성 있는 물질들을 배출함으로 골칫거리가 되고 있다. 몇몇 algal 독소는 세포막을 용혈시킴으로 생물을 파괴시키기도 한다. 이러한 용해 활성도 테스트를 위해서 많은 분석 방법들이 개발되어 왔다. 이러한 모든 것들은 적혈구 용혈과 540nm에서 흡수된 빛을 방출하기 때문에 용혈된 헤모글로빈을 측정하는데 기본원리에 기초를 두고 있었다. 용혈 작용을 하는 물질을 테스트 하는 방법은 준비 단계, 용혈 단계, 원심 분리 단계, 검출 단계 그리고 평가 단계로 나뉘어 진다. 이러한 모든 단계를 향상시킴에 의해 분석을 수행하는데 있어서 증가를 가져왔다. 특히나 분석 이론을 마이크로 플레이트로 옮김으로 인해 많은 샘플을 평행으로 동시에 수행 할 수 있음으로 시간을 줄일 수 있었다.이 향상된 적혈구 용혈 어세이(Erythrocyte Lysis Assay, ELA)의 중요한 변수는 414nm에서 흡광도를 측정함으로 용혈 작용을 검출한다는 것이다. 기존의 540nm에서 측정하는 것 보다 10배 이상 많이 흡광된다. 더 발달된 방법에서는 검출 시약으로 형광 염료를 포함하는 리포좀에 의해 적혈구를 대체하는 것도 가능하다. 이러한 리포좀 용혈 어세이는 혈액을 이용할 필요가 없어서 이 어세이에서는 검출 시약의 소스로서의 동물이 필요 없다. 게다가 용혈을 더 효율적으로 촉진하기 위해서 리포좀의 막을 구성하는 것도 가능할 것이다. 리포좀에 형광 염료가 채워지거나 그것의 막에 형광 측정법으로 검출되어지는 형광 염료가 마크된다. 흡광 형광 검출 방법과 비교해 볼 때 더욱 민감하다.