일반기술

포리가라크트로나제의 대장균에 의한 생산 시스템

본 발명은, 포리가라크트로나제(porygalacturonase)의 대장균에 의한 생산 시스템에 관한 것이며, 포리가라크트로나제, 대응하는 DNA 배열, 벡터, 형질 전환된 숙주, 포리가라크트로나제의 제조 방법에 관한 것이다. Saccharomyces cerevisiae X2180A 유래의 포리가라크트로나제 유전자를, 대장균 발현 벡터(예를 들면, pQE80L:Quiagen사)에 연결하여 치오레드키신레다크타제(trxB) 및 그르타치온레다크타제(gor)의 활성이 없는 대장균주(예를 들면, origami B주: Novagen사)에 도입한다. 얻을 수 있는 형질 전환체(예를 들면, FERMP-19207, FERMP-19208)를 배양하는 것으로써, 활성이 있는 포리가라크트로나제를 염가로 생산할 수 있다.현재 시판되고 있는 포리가라크트로나제는 필요하지 않은 다른 효소도 혼입하고 있어, 순도가 높은 것은 생화학용의 시약으로서 입수할 수 있지만 가격이 비싸므로 염가의 포리가라크트로나제의 제조는 식품공업계에 있어 중요한 과제이며, 더욱 높은 순도를 달성하는 것은, 생화학 시약 업계에 있어 중요한 과제이다. 펙틴은 고등 식물의 세포간물질의 주요한 구성 성분이며, 광범위하면서 대량으로 천연에 존재하는 물질이다. 포리가라크트로나제는 과즙의 청정화·여과성 개선, 수량 향상, 야채 과실의 퓌레 제조, 와인의 여과 향상제, 또 생화학용의 상품으로서 판매되고 있다. 그러나 효모 등 천연에 존재하는 포리가라크트로나제 유전자를 그대로 통상의 대장균에 도입해도 발견되지 않았던 것이지만 본 발명에 의해 처음으로 포리가라크트로나제의 대장균(Origami B)에 의한 생산이 가능하게 되어, 활성을 가지는 포리가라크트로나제를 저렴한 비용으로 대량으로 생산할 수 있게 되었다.