일반기술

카보네이트 이온 선택성 ＦIＡ바이오센서 및 이를이용한 이소시트레이트 정량분석방법

본 발명은 카보네이트 이온 선택성 FIA 바이오센서(CO 32- selective FIA biosensor)및 이를 이용한 이소시트레이트(isocitrate) 정량분석방법에 관한 것으로 고정화된 효소 반응기를 사용하여 제작한 본 발명 카보네이트 이온 선택성 FIA 바이오센서는 운반버퍼(carrier buffer)를 0.1M Tris-H 2 SO 4 (pH 7.5)와 0.6M Tris-H 2 SO 4 (pH 11.0)로 분할하고 흐름속도를 유속 13.6mL/hr, 시료주입량을 100μL, 튜빙 내경을 0.89mm 하여 식품내 함유된 이소시트레이트를 정확하게 정량할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.본 발명은 TFADB(ionophore), PVC(polymeric matrix), DOA(plasticizer), TDMACI(lipophilic additive)를 THF에 용해시키고 이를 유리판에 부어 막을 제조한 후 지시전극에 부착하여 카보네이트 이온 선택성 막과 카보네이트 이온 선택성 전극을 제조하는 단계; 아미노프로필 글래스 비드(aminopropyl glass beads)를 글루타르알데하이드(glutaraldehyde)와 혼합하여 반응시킨 후, 이 글래스 비드에 이소시트릭 디하이드로게나아제(isoctric dehydrogenase)를 결합시켜 고정화시킨 후 테플론 튜빙(Teflon tubing)에 채워 효소반응기를 제조하는 단계; 다양한 운반버퍼, pH,흐름속도, 시료주입량, 튜빙내경 및 온도 등에 따라 상기 제조한 카보네이트 이온 선택성 전극을 사용하여 센서에 미치는 감도와 선택성을 조사하는 단계; 표준 이소시트레이트 시료에 여러 종류의 당과 유기산을 일정농도, 일정량으로 첨가하고 상기 카보네이트 이온 선택성 전극을 사용하여 센서감응에 미치는 영향을 조사하는 단계; 및 본 발명 카보네이트 이온 선택성 FIA 바이오센서와 GC를 이용하여 사과, 포도, 딸기, 토마토 쥬스 시료에 함유된 이소시트레이트를 정량분석한 후 결과를 비교하여 본 발명 카보네이트 이온 선택성 FIA 바이오센서가 신뢰성이 있음을 확인하는 단계로 구성된다.