일반기술

인간 간암 진단방법, 그 진단용 조성물 및 그 프라이머

본 발명은 인간 간암에서 과잉발현되는 유전자들을 밝히기 위하여 마이크로어레이와 리프리젠테이션널 차이 분석을 연결하였다. 본 발명은 긴 사슬 지방산-코엔자임 A 리게이즈 4, 파네실 디포스페이트 신쎄이즈, 신데칸 2, 이모파밀-결합단백질, 멜라노마에서 프레퍼렌셜리 발현된 항원, 및 히스티딘 암모니아-리에이즈을 포함하는 인간 간암진단용 조성물, 그 조성물을 이용한 진단방법 및 그 프라이머에 관한 발명이다.본 발명에서 새롭게 밝혀낸 인간 간암에서 과잉발현에 관여하는 유전자들은 종양의 진행과 관련이 있고, 인간 간암의 치료 및 진단에 유용하게 사용될 수 있다.상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1의 긴 사슬 지방산-코엔자임 A 리게이즈 4, 서열번호 2의 파네실 디포스페이트 신쎄이즈, 서열번호 3의 신데칸 2, 서열번호 4의 이모파밀-결합단백질, 서열번호 5의 멜라노마에서 프레퍼렌셜리 발현된 항원, 및 서열번호 6의 히스티딘 암모니아-리에이즈으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자를 포함하는 인간 간암 진단용 조성물을 제공한다.또 본 발명은 환자의 간 조직으로부터 RNA를 분리하는 단계, 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하는 단계, 상기 cDNA로부터 상기 서열번호 1의 긴 사슬 지방산-코엔자임 A 리게이즈 4, 서열번호 2의 파네실 디포스페이트 신쎄이즈, 서열번호 3의 신데칸 2, 서열번호 4의 이모파밀-결합단백질, 서열번호 5의 멜라노마에서 프레퍼렌셜리 발현된 항원, 및 서열번호 6의 히스티딘 암모니아-리에이즈으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자에 특정한 프라이머를 사용하여 cDNA부분을 증폭하는 단계 및 상기 증폭된 cDNA를 통하여 인간 간암을 진단하는 단계를 포함하는 간암진단 방법을 제공한다.상기 진단방법에서 HCC의 경우 정상 간조직에 비하여 과잉발현되는 상기의 여섯 개의 유전자의 mRNA 또는 cDNA를 통하여 인간 간암의 여부를 확인할 수 있다.상기의 진단방법에서 상기의 유전자들에 특정한 프라이머 세트는 서열번호 7에서 18로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 프라이머세트인 것이 바람직하다.또한 본 발명의 진단방법은 항원-항체반응을 기초로하여 환자의 간 샘플로부터 토탈 단백질을 분리하여 SDS-PAGE 로 전기영동한 후 막에 트랜스퍼하고 FACL4, FDPS, 신데칸-2, EBP, PRAME, HAL 등의 항체를 이용해 FACL4, FDPS, Syndecan-2, EBP, PRAME, HAL 등의 항원단백질 레벨을 검출하는 웨스턴 블럿을 이용하거나 샘플조직을 슬라이드에 붙인 후 항체를 이용해 조직에서의 단백질 발현여부를 조사하는 면역히스토케미컬 염색을 통하여 인간 간암을 진단할 수 있다.