일반기술

간세포 배양용 매트릭스

본 발명은 간세포 배양용 매트릭스에 관한 것으로서, 경제성 있고 높은 공극율을 갖는 일반 폴리우레탄폼을 젤라틴(gelatin)수용액으로 코팅하여 급속 냉각후 동결 건조시키고, 동결건조 후 가교제인 글루타알데히드(glutaraldehyde)수용액에 담궈 가교반응시켜서 제조하므로서, 인체와 유사한 배양환경으로 간세포의 배양시 강한 지지력과 활성화를 기대할 수 있도록 한 것이다.본 발명은 일반 폴리우레탄폼을 이용하여 간세포를 고밀도로 배양할 수 있도록 한 매트릭스에 관한 것이다.간 질환자들의 간기능을 대체하는 간 보조장치용 매트릭스는 경제성과 고밀도의 배양기술 및 배양시 간세포의 활성화를 기대할 수 있는 조건이 선행되어야 하며, 이러한 조건들에 가장 근접한 제품으로서는 값싸고 또 높은 공극율의 폴리우레탄 폼을 예로 들 수가 있다.그러나 폴리우레탄폼은 싼 값으로 쉽게 구할 수가 있어 경세성을 만족하고 또 높은 공극율로 보다 많은 량의 간세포를 배양할 수 있는 공간은 확보되나, 재질 특성상 간세포의 배양시 지지력은 전혀 기대할 수가 없고, 각 셀의 크기가 커 간세포의 주입시 쉽게 흘러내리게 된다.따라서 현재까지 간세포를 교반기에 투입 교반하여 세포끼리 구상체로 뭉치게하여 크기를 키운 다음 셀에 주입하는 등 다양한 연구가 시도되고 있으나, 점착력 약화 및 간세포의 활성화는 기대할 수가 없어 만족할 만한 결과를 얻지 못하고 있는 실정이다.일반 폴리우레탄폼을 소정의 크기로 절단하여 계면활성제로 세척하고, 세척후 알콜을 이용하여 폴리우레탄폼이 함유하고 있는 각종 화학물질을 제거하고, 알콜 처리 후 3차수로 세척한 다음 고압증기를 이용하여 멸균 및 잔존하는 화학물질을 제거한다.이물질과 화학물질 제거 및 멸균처리된 폴리우레탄폼은 항온조에서 녹인 젤라틴(gelatin) 수용액에 담궈서 각 셀 표면에 젤라틴이 코팅되게 한 다음 급속 냉각기에 투입하여 급속 냉각시키고, 냉각 후 동결건조기에 투입하여 동결건조시키고, 동결건조 후 가교제인 글루타알데히드(glutaraldehyde) 수용액에 침수시켜 가교반응을 진행시킨다.상기에 있어 젤라틴은 불용성인 콜라겐(collagen)의 변성체로서 가격이 싸고 또 물에 잘 녹는 수용성이므로 폴리우레탄폼의 표면에 골고루 도포해 줄 수가 있다.다만 젤라틴은 크게 산성타입과 중성타입의 2종으로 분류되고, 이중 산성타입은 폴리우레탄폼에 도포하기까지 복잡한 공정이 추가되므로 중성타입을 이용하는 것이 바람직하며, 중성타입 또한 약 37℃ 이상에서는 졸 상태가 되어 흘러내리게 되나, 그 표면에 가교제인 글루타알데히드를 도포해 주므로서 상온에서 졸화에 의한 흘러내림을 방지할 수가 있게 된다.가교후에는 3차수로 세척하여 불필요한 가교제를 세척하고, 세척후에는 글루신(glycine) 수용액에 침수시켜 미반응 글루타알데히드 수용액을 제거하여서 된 것이다.본 발명은 모재인 폴리우레탄폼의 표면을 개질한 것으로서, 개질된 표면은 콜라겐의 기본 성질을 일부 유지하고 있는 젤라틴으로 구성되므로 체내와 유사한 배양환경을 조성해 줄 수가 있게 된다.또한 간세포 배양용 매트릭스로서의 이용시 중성타입의 젤라틴 층은 그 표면에 도포된 가교제인 글루타알데히드에 의해보호되므로 상온에서도 안심하고 사용할 수가 있게 된다. 것을 확인하였다.