일반기술

근육에서 특이적으로 발현되는 유전자

본 발명은 근육에서 특이적으로 발현되는 단백질 및 그 단백질을 코딩하는 유전자에 관한 발명으로 더욱 상세하게는 골격근, 평활근 및 심장근 등 모든 근육에서 특이적으로 발현하는 인간 URB 단백질에 관한 발명이다.일반적으로 인간 URB는 최근 발견된 마우스 URB("UPRegulated in Bombesin receptor subtype-3 deficient mice"로 표시)(K. Aoki, Y.J. Sun, S. Aoki, K. Wada, E. Wada,Biochem. Biophys. Res. Commun. 290 (2002) 1282-1288.)와 매우 큰 상동성을 갖는다 [4]. 비록 Aoki 등은 마우스 URB가 체중조절 및 에너지 대사에서 중요한 역할을 할 것으로 예측하였지만 그것의 정학한 기능은 아직 파악되지 않고 있다. 인간 URB는 또 최근 클론된 눈 형성에 관여하는 닭 렌즈에서 클론된 equarin-L과 약 68%의 상동성을 갖는다(H. Mu, K. Ohta, S. Kuriyama, N. Shimada, H. Tanihara, K. Yasuda, H.Tanaka, Mech. Dev. 120 (2003) 143-155). 도메인 1 및 2간 N 말단 140 아미노산 및 서열의 동일성이 45%로 매우 낮고 발현 패턴이 다르기 때문에 URB가 닭 equarin-L과 비슷한 유전자 같지는 않다.한편, 모유두는 모낭의 기저에 위치하고 모 성장의 유도 및 유지에 필수적인 역할을 한다고 알려졌다(A.J.Reynolds,C.A. Jahoda, Ann. N. Y. Acad. Sci. 642 (1991) 226-242). 배양된 모유두 세포는 초기 계대에서 정상 섬유아세포 유사형태를 보이고(A.G.Messenger, Br. J. Dermatol. 110 (1984) 685-689.), 반면에 모낭사이(interfollicular) 피부 섬유아세포, 모유두세포에서는 in vivo에서 새로운 모낭 성장을 유도할 수 있다(A.J. Reynolds, R.F. Oliver, C.A. Jahoda, J.Cell Sci. 98 (1991) 75-83.). 모발 발생 및 주기에 특정하게 관련된 유전자를 동정하기 위한 시도로 본 발명자들은 최근 cDNA 마이크로어레이 분석을 사용하여 배양된 모유두 및 피부 섬유아세포 간의 유전자 발현 프로화일을 비교하였다. 이 분석은 모유두 세포에서 차별적으로 발현하는 다수의 유전자 전사체를 동정할 수 있게 하였다. 본 발명에서는 그 들 중에 마우스 Urb 유전자와 큰 동종성을 보이는 것을 클로닝하고 그 특성을 파악하였다.상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 서열 목록 1에 기재된 근육 특이적으로 발현되는 단백질을 제공한다.또한 본 발명은 상기 근육 특이적으로 발현되는 단백질을 코딩하는 근육 특이적으로 발현되는 서열목록2의 유전자를 제공한다.본 발명에서 근육은 골격근, 평활근 또는 심장근인 것이 바람직하다.이하 비한정적인 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.실시예 1: 세포 배양모유두와 섬유아세포의 일차 배양은 상기에서 기술한 방법(A.G.Messenger, Br. J. Dermatol. 110 (1984) 685-689.)에 따라 진행하였다. 생체검사 견본(Biopsy specimens)을 경북대학교 병원(대구, 대한민국)에서 남성형 탈모증을 가진 환자의 모발 이식 중, 환자의 동의를 얻어 후두부 모발로부터 얻었다. 그 견본을 즉시 Dulbecco's modified Eagle's 배지(DMEM; Gibco BRL, USA)에 즉시 담구었다. 성장기(anagen) 모발을 하나씩 각각 분리한 후, 모유두를 해부용 현미경을 사용하여 분리하였다. 피부 섬유아세포는 같은 조직의 모낭사이 진피로부터 채취하였다. 분리된 모유두 및 피부 섬유아세포를 조심스럽게 소의 타입 1 콜라겐으로 코팅된 플라스틱 디시에 옮기고, 페니실린(100 U/ml), 스트렙토마이신(100 ㎍/ml) 및 20% 피탈 캘프 혈청이 첨가된 DMEM에서 37℃, 95% 공기 및 5% CO2 조건에서 배양하였다. 외식편을 수일간 방치하고 그 배지를 3일마다 교환하였다. 세포가 디시에 가득차면 세포를, Hank's balanced salt solution (HBSS)내의 0.25% trypsin/10mM EDTA로 모으고 1:3의 분리비로 계대 배양하였다. 후에 모유두 및 섬유아세포를 10% 피탈 캘프 혈청이 첨가된 DMEM에서 유지하였다.