일반기술

티지에프베타3 유전자 돌연변이를 이용한 구순구개열 질환의 진단방법

본 발명은 TGF-B3 유전자의 돌연변이를 이용한 구순구개열 질환의 진단방법에 관한 것으로 본 발명의 내용인 TGF-B3 유전자의 한국인 돌연변이는 지금까지 알려져 있지 않았으며, 한국인 특이적인 유전자 염기서열 상의 변이이다.구순구개열 환자조직과 정상인의 조직에서 TGF-B3의 돌연변이를 조사한 결과 정상인에 비해서 구순구개열 환자조직에서 같은 위치에서 발현되는 돌연변이를 발견하여 TGF-B3 유전자 돌연변이가 구순구개열의 유발인자라는것이 밝혀졌기 때문에, 이러한 TGF-B3 유전자 돌연변이 방법을 통해 구순구개열 질환 소인을 진단하는데 이용될 수 있다. 또한 본 발명은 구순구개열 소인을 진단하는 효율적인 방법에 관한 것이다.본 발명에서 돌연변이〔Mutation〕및 다형성〔Polymorphism〕을 표현하는데 사용된 용어들의 정의는 다음과 같다.IVS는 Intervening Sequence, 즉 인트론을 의미한다. 돌연변이의 정의에 있어 표시되는 숫자는 TGF-B3 유전자의 염기서열상에서 돌연변이가 시작된 위치를 의미하며, IVS 문자가 표시되지 않은 돌연변이의 숫자는 인트론(Intron) 염기서열을 제외한 mRNA의 염기서열상의 위치를 의미한다. 본 발명에서 염기서열상의 위치를 설명하는 숫자는 GenBank Accession AY208161(TGF-B3)상의 염기서열을 참조하여 표시하였다. GenBank Accession 번호에 따라 TGF-B3 돌연변이의 표기가 달라질 수 있다.본 발명은 모든 정상 TGF-B3 유전자의 염기서열에 적용된다. 삽입(insertion) 돌연변이는 'ins'으로 표시하고, 결손(deletion) 돌연변이는 'del'로 표시하였다. 'ins'과 'del' 다음의 문자는 실제 삽입 또는 결손된 뉴클레오티드(nucleotide)들을 의미한다. 뉴클레오티드가 치환(substitute)된 돌연변이를 표시할 때 기호 ')'를 사용하였는데, ')'앞의 문자는 정상 TGF-B3 유전자의 뉴클레오티드이며, ')' 뒤의 문자는 돌연변이 TGF-B3 유전자의 뉴클레오티드이다. 그리고, ')' 뒷의 X는 ')' 앞의 뉴클레오티드가 다른 뉴클레오티드로 치환되어 종결코돈(stop codon)이 생겨, 숫자 뒤의 염기서열이 코딩하는 아미노산이 결손되었음을 의미한다.우선, 본 발명은 정상(normal) 또는 돌연변이(mutant) TGF-B3 유전자에 결합(hybridize)하는 하기 군으로부터 선택된 올리고뉴클레오티드 (oligonucleotide)에 관한 것이다:(1) TGF-B3 유전자의 인트론 5상의 18141번째 뉴클레오티드인 A가 G로 치환되어 있는 것을 검출할 수 있는,TGF-B3 유전자의 18141번째 뉴클레오티드를 포함하는 영역에 특이적으로 결합하는 올리고뉴클레오티드;상기 첫 번째 돌연변이는 TGF-B3에 나타난 IVS5+18141 A)G로서, IVS5+18141위치의 뉴클레오티드인 A가 G로 치환된 것이며, 엑손(Exon)이 아닌 엑손과 인트론(Intron) 접경 부위에 나타난 돌연변이이다. 아미노산을 코딩하는 부위가 아니므로 아미노산 서열에는 변화가 없으나, mRNA의 이차구조에 변형을 초래하거나 스플라이싱의 변화로 인한 RNA 생성차이 때문에 TGF-B3 발현양상의 변화를 초래 할 수 있다. 또한 조절 단백질의 유전자에 대한 결합 친화도에 변화가 올 수도 있다고 보인다.