일반기술

ＭＪ1 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 이를 이용한인테그라아제 ＭＪ1의 제조방법

*원리 및 구성본 기술은 장내구균 용원성 파지 φFC1로부터 얻어진 MJ1 유전자를 이용하여 재조합 인테그라아제 MJ1를 제조하는 방법과 관련된 기술이다. 재조합 인테그라아제 MJ1은 조효소 없이 효소 단독으로도 활성을 지니며, E.coli내에서도 활성을 나타내기 때문에 E.coli의 염색체는 물론 고등생명체의 염색체에 특정유전자를 삽입하는데 유용하게 사용될 수 있다.*개발배경자외선으로 인덕션하여 용원성 계통 균주의 배양을 통해서 발견된 장내구균 용원성 파지 φFC1은 박테리아의 염색체에 부위-특이적 재조합을 통해 안정된 용원균을 형성하게 되는 데, 부위 특이적인 재조합은 파지의 접합부위와 박테리아의 접합부위 사이에서 일어난다. 여기서 부위-특이적인 재조합효소를 인코딩하는 것으로 추정되는 ORF를 MJ1이라 이름 붙였으며, MJ1은 높은 수준으로 발현됨에도 불구하고 봉입체 형태를 띠는 불용성 단백질을 형성하여 특정 효소의 활성 측정이 불가능하였다*중요성 및 독창성서열번호 3의 MJ 1 유전자를 포함하는 재조합 벡터 PTMJ1.를 도입하여 형질전환체 E.coliBL21을 첨가한 후 15℃에서 인덕션하여 배양한다. 배양액 500mL를 -70℃에서 얼린 다음 다시 녹여 15mL의 라이시스 버퍼에 정치한 후 초음파 처리하여 세포를 파쇄한다. 그리고 추출물을 원심 분리하여 얻어진 상등액에 Ni-NTA 레진을 첨가한 다음 바인딩 시켜 세척하고, 일루션 버퍼로 단백질을 추출한다. 이와 같은 과정을 수행하여 인테그라아제 MJ1 효소를 제조하여 고등생명체의 염색체에 특정유전자를 삽입하는데 유용하게 사용할 수 있다.*적용제품 및 앞으로의 활용분야본 기술의 재조합 인테그라아제 MJ1은 E.coli의 염색체뿐만 아니라 고등생명체의 염색체에 특정유전자를 삽입하는 경우에도 유용하게 사용될 수 있는 기술로, 각종 질병과 관련된 유전자 치료나 의약품을 제조하는 산업에서 활용될 수 있다.* 주요적용제품염색체를 이용한 생명공학 품목생명공학 유전자 기술 품목*특징 및 장점- 조효소가 없더라도 재조합 인테그라아제 MJ1 만으로도 활성을 나타낸다.- E.coli 내에서도 활성을 나타낸다.- E.coli의 염색체에 특성 유전자를 삽입하는 벡터시스템에 사용될 수 있다.- 고등생명체의 염색체에 특성 유전자를 삽입하는 경우에 사용될 수 있다.