일반기술

단백질의 선택적 표지방법

본 기술은 적절한 동위원소 표지된 아미노산들의 선택 및 첨가 시기, 중수소(D2O)의 사용 및 다른 경로로의 전이를 저해하는 저해제 등을 이용하여 최적화된 잔기 특이적인 선택적 표지방법에 관한 것이다.동위원소 표지하는데 있어서 적절한 동위원소 표지된 아미노산들의 이용과 시기, 중수소(D2O)의 사용, 다른 경로로의 전이를 저해하는 기작을 적용한 최적의 방법이 필요하게 되었다.세포를 H2O를 이용하여 제조된 배지에 접종하여 배양하는 단계, 접종하여 성장시킨 세포를 중수소 비율이 일정하게 증가되는 D2O를 이용하여 제조된 배지에 접종하고 성장시키고 배양하는 단계, 배양된 세포를 13C 및/또는 15N-발린(VAL) 및 루신(LEU), 또는 아이소루신(ILE)을 포함하는 화합물 및 저해제를 첨가하는 단계 및 저해제 첨가 후 일정시간 후에 세포를 유도하는 단계를 포함한다.단백질의 선택적 표지방법에 관한 것으로 적절한 동위원소 표지된 아미노산들의 선택 및 첨가 시기, 중수소(D2O)의 사용 및 다른 경로로의 전이를 저해하는 저해제 등을 이용하여 최적화된 잔기 특이적인 선택적 표지방법을 제공하여 역시 > 95% 표지 효과를 얻을 수 있다. 본 기술은 적절한 동위원소 표지된 아미노산들 또는 그 전구체의 선택 및 첨가 시기, 중수소(D2O)의 사용 및 다른 경로로의 전이를 저해하는 저해제 등을 이용하여 최적화된 잔기 특이적인 선택적 표지방법을 제공하는 것이 가능한 효과를 갖는다.