일반기술

이온성 액체를 이용하여 단백질을 재접힘시키는 방법

본 발명은 이온성 액체를 이용하여 단백질을 재접힘시키는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 재접힘시키고자 하는 단백질 시료를 준비하는 단계 및 이온성 액체를 포함하는 재접힘 버퍼를 이용하여 단백질을 재접힘시키는 단계를 포함하는 이온성 액체를 이용하여 단백질을 재접힘시키는 방법에 관한 것이다.본 발명에 따른 단백질 응집체를 재접힘시키는 방법은 종래의 공정에서 사용되는 용매를 대체할 수 있으며 또한, 이온성 액체의 특이적인 성질을 이용할 경우 분리 및 정제에도 효과를 볼 수 있어 산업발전에 이바지 할 수 있다.본 발명은 단백질을 재접힘시키는 방법에 있어서, 재접힘시키고자 하는 단백질 시료를 준비하는 단계 및 이온성 액체를 포함하는 재접힘 버퍼를 이용하여 단백질을 재접힘시키는 단계를 포함하는 이온성 액체를 이용하여 단백질을 재접힘시키는 방법을 제공한다.본 발명에 의하여 재접힘시키고자 하는 단백질의 종류에는 특별한 제한이 있는 것은 아니며, 단순희석법 또는 회분식 크로마토그래피 등에 의해 분리될 수 있는 모든 단백질에 적용이 가능하다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 재접힘시키고자 하는 단백질 시료로서 환원 및 변성된 라이소자임(lysozyme)을 사용하였다. 또한, 단백질 재접힘 버퍼로는 Tris-HCl(pH 8.2), EDTA, 환원된 글루타치온, 산화된 글루타치온으로 구성되는 버퍼에 하기의 이온성 액체를 포함하는 것을 사용할 수 있다. 본 발명에 따른 상기 재접힘 버퍼는 단백질의 재접힘 효율을 최적화하고 올바른 이황화결합을 형성시키기 위해 첨가제로서 변성제 또는 환원제를 포함하는 것이 바람직하다.본 발명에 따른 상기 이온성 액체는 친수성 이온성 액체인 것이 바람직하다. 소수성 이온성 액체이더라도 온도, 다른 이온의 농도 등에 따라 물에 녹는 현상을 나타내므로 본 발명에 따른 이온성 액체를 포함하는 재접힘 버퍼로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트(Emim[BF4]), 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리플루오로메탄설포네이트(Emim[CF3SO3]), 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 메틸설페이트(Emim[CH3SO4]) 또는 1-부틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트(Bmim[BF4])에 있어서, 앞의 세가지 이온성 액체는 친수성 이온성 액체이고 뒤의 1-부틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트(Bmim[BF4])는 온도에 따라서 친수성과 소수성 성질을 모두 갖는 이온성 액체이다.