일반기술

층분리배양법을 이용한 골수에서의 중간엽 줄기세포 분리방법

본 발명은 중간엽 줄기세포를 분리하는 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 세포 배양용기를 이용한 층분리배양법에 의해 중간엽 분리세포를 분리하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 분리방법은 사람 골수에서 중간엽 줄기세포를 간편하고, 경제적이며, 오염 가능성을 최대한 줄일 수 있는 방법으로 임상시험 및 세포치료제 생산에 이용될 수 있다.본 발명의 목적은 중간엽 줄기세포의 비중을 이용한 층분리배양법 및 이를 이용하여 분리된 중간엽 줄기세포를 제공하는 것이다.줄기세포를 수득하는 방법으로 냉동 배아세포에서 얻는 방법이 효율적이라고 할 수 있지만 윤리적인 면에서 아직도 많은 논란이 있다.줄기세포를 추출할 수 있는 배아를 생명체로 볼 것인가 아니면 세포덩어리로 볼 것인가가 논란의 핵심으로 종교계 등에서 배아복제 및 배아실험을 강력히 반대하고 있다. 줄기세포를 추출할 수 있는 방법으로는 냉동배아 이용방법뿐만 아니라 체세포 핵이식방법이나 성체 줄기세포이용방법이 있다. 체세포 핵이식방법은 성인세포에서 얻은 핵을 이미 핵을 제거한 난자에 넣어 배아 줄기세포를 얻는 방법으로, 자신의 세포에서 분화되기 때문에 거부반응이 없다는 장점이 있으나 배아에 대한 개념규정논란, 또 이 배아를 자궁에 이식하면 "인간복제"로 이어 진다는 점 등의 윤리적인 문제가 있다. 성체줄기세포는 중추신경계나 골수 등 각종 장기에 남아 성장기의 장기발달과 손상시의 재생에 참여하는 세포이다. 골수는 조혈모세포로 분화하는 줄기세포가 주요한 성분을 이루지만 비조혈모세포로 분화하는 줄기세포도 일부 존재한다. 이 세포들은 조혈모세포의 성장을 보조하는 기능이 있고, 조혈모세포와 같이 배양시 분화하지 않으면서 재생됨이 관찰되어 가소성 유착 세포 혹은 집락형성단위 섬유아세포라고 명명되었다가 골수 기질 세포 혹은 중간엽 줄기세포라고 불리게 되었다. 성체 줄기세포를 이용하여 손상된 인체의 모든 기관을 대체하려는 시도가 활발히 시도되고 있으며 현재 골절, 건손상, 연골손상, 간부전 , 심근경색, 신경손상, 뇌손상, 뇌졸중, 파킨슨병, 기타뇌신경퇴행성 질환 등의 치료를 위한 활발한 연구가 진행 중이다. 이렇게 활발한 임상 적용의 시도에도 불구하고 아직 골수에서 중간엽 줄기세포의 분리나 배양들이 임상시험에 적용될 수 있게 확실하게 정립된 방법이 없는 실정이다. 이에, 본 발명은 중간엽 줄기세포의 비중이 작음에 착안한 본 발명의 층분리배양법이 세포 배양용기 외에 일체의 다른 기구를 사용하지 않는 간편하고, 경제적이며, 오염 가능성을 최대한 줄일 수 있는 방법이고 상기 방법에 의해 분리된 중간엽 줄기세포는 다른 세포로 분화가 가능함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.