일반기술

소 뇌 유래의 막 결합 중성형 스핑고 마이엘리네이즈의 정제방법

본 발명은 소 뇌에서 분리된 막결합 중성형 스핑고마이엘리네이즈, 이의 정제 방법 및 이에 대한 모노클로날 항체에 관한 것으로, 본 발명에 따른 스핑고마이엘리네이즈는 소 뇌의 신경세포 막에서 유래하고 분자량이 60 kDa이며 Mg2+에 의존적이고 pH 6.0 내지 9.0에서 활성을 갖는 것을 특징으로 하며, 소 뇌 조직을 균질화하고 세포찌꺼기와 핵을 제거한 다음 원심분리하여 얻은 세포막 펠렛을 암모니움 설페이트가 함유된 완충액 중에서 추출하고 이 추출액으로부터 음이온 교환 크로마토그래피한 후 트리톤 X-100이 포함된 완충액 중에서 초음파 파쇄하고 원심분리하여 얻은 상층액을 소수성 크로마토그래피, 음이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피, 소수성 고성능 액체 크로마토그래피 및 양이온 교환 고속 단백질 액체 크로마토그래피를 차례로 수행하여 정제할 수 있으며, 본 발명에 따른 모노클로날 항체는 하이브리도마 SM1A5(기탁번호 제 KCLRF-BT-00025 호)에 의해 생산된다본 발명의 스핑고마이엘리네이즈 N-mSMase ε은 신경세포의 막에만 존재하므로, 파킨슨 병, 알쯔하이머 병 등의 뇌 질환에 대한 치료제 개발에 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 스핑고마이엘리네이즈 N-mSMase ε은 그 저해제 또는 활성화제의 탐색 뿐만 아니라 X-ray 또는 NMR에 의한 구조분석에도 유용하게 사용될 수 있다. 한편, 본 발명의 스핑고마이엘리네이즈에 특이적인 모노클로날 항체는 스핑고마이엘리네이즈 N-mSMase ε의 기능과 세포내에서의 조절 기전 등에 대한 연구 뿐만 아니라 N-mSMase ε의 효율적인 분리정제에도 유용하게 사용될 수 있으며, 암과 퇴행성 질환의 진단용 키트에도 유용하게 사용될 수 있다.