일반기술

데옥시니발레놀을 생산하는 곰팡이의 검색 및 정량방법

본 기술은 데옥시니발레놀(DON)을 생산하는 곰팡이의 검색 및 정량방법에 관한 것으로, 푸사리움속(Fusarium) 곰팡이 분리균을 배양하고 DON 생성균 검색을 위하여 시료를 조제한 후 TLC(thin layer chtomatography)에 의하여 DON 생성균을 검색하고 Enzyme amplification system immunoassay법에 의하여 DON을 분석함으로써 낮은 수준의 DON 생성 측정이 가능하고 DON 생성균의 검색에 신속하고 민감하게 사용될 수 있는 뛰어난 효과가 있다.데옥시니발레놀(DON)을 생산하는 푸사리움 속 곰팡이의 검색 및 DON 정량방법에 있어서, 시설원예산물과 토양으로부터 채취 분리한 푸사리움 속 곰팡이의 CONIDIA를 YES 배지를 넣고 멸균한 시험관에 접종하여 25℃에서 15일간 배양한 후, 에틸 아세테이트로 추출하여 유기용매 층을 농축하고, 다시 에틸 아세테이트로 재용해시켜 시료를 제조한 다음, 전개용매로 톨루엔:아세톤:메탄올=5:3:2(V/V) 혼합용액을 사용하고, 발색제로 20% 알루미늄 클로라이드 안하이드로스(ALUMINUM CHLORIDE ANHYDROUS)를 사용하여 TLC에 의해 DON 생성균을 검색한 후, 표준 DON 또는, 상기 ELISA 시료와 DON-3 모노클로날 하이브리도마 세포 배양상등액을 이용하여 제작한 DON-AB의 1:300 희석액을 각 웰에 주입하여 4℃에서 하룻밤 반응시키고, 다시 1:5000으로 희석한 2차 항체 ALP-LABELED GOAT ANTI-MOUSE IGG를 분주하여 1시간 동안 실온에서 반응시킨 후, 기질용액[NADP;0.1NM NADP(NAD FREE) IN 50MM DIETHANOLAMINE BUFFER(PH 9.5) WITH 1MM MGCL 2 AND NAN 3 100ΜL]을 분주하여 실온에서 1시간 동안 반응시키고, 발색 후 ELISA LEADER로 490NM에서 흡광도를 측정하여 DON을 정량하는 것을 특징으로 하는 데옥시리발레놀(DON)을 생산하는 곰팡이의 검색 및 정량방법.