일반기술

레티노산에 의해 발현이 조절되는 재조합 리포터 유전자를 가지는 형질전환 세포주 및 이를 이용한 레티노산유사물질 및 저해물질의 생물학적 검색 방법

본 기술은 레티노산 (retinoic acid)에 의해 발현이 조절되는 재조합 리포터 유전자 컨스트럭트, 그의 형질전환 세포주 및 이를 이용한 레티노산 유사물질 및 저해물질의 생물학적 검색방법에 관한 것이다. 본 발명의 검색방법은 1) 레티노산에 의해 발현이 조절되는 재조합 리포터 유전자 컨스트럭트 및 이를 포함하는 형질전환 세포주를 제조하는 단계,2) 상기 형질전환 세포주에 레티노산과 검색 대상 화합물을 처리하여 배양하는 단계, 3) 상기 배양액으로부터 단백질을 분리하는 단계,4) 분리된 단백질에 리포터 유전자의 기질을 첨가하여 효소-기질 반응을 유도하는 단계,5) 상기 효소-기질 반응에 의해 생성된 발광정도를 측정하는 단계를 포함한다.생물체로 유입된 레티노산 유사물질 또는 저해물질은 레티노산 수용체에 작용하여 그 효과를 나타내게 되므로 단계 1)에서는 레티노산 수용체를 과량 발현하도록 유전자 조작된 형질전환 세포주를 사용하는 것이 바람직하다. 본 기술에서는 유전자 재조합 기술을 이용하여 레티노산 수용체가 인지하는 유전자 서열인 TREpal에 루시퍼라제 리포터 유전자를 융합시켜 재조합 리포터 유전자 컨스트럭트를 제작하고 이를 인체 신경아세포에 형질전환한 후 레티노산에 특이적으로 반응하는 세포군을 선택적으로 증식시켜 형질전환 세포주를 선별한다.본 기술의 형질전환 세포주를 이용한 레티노산 유사물질 및 저해물질의 생물학적 검색방법은1) 조작이 간단하고 고가의 장비가 필요하지 않아 기본적인 세포 배양기술과 효소활성 측정 시스템만 있으면 쉽게 이용할 수 있고,2) 저렴한 비용으로 일시에 다수의 물질을 검색할 수 있으며,3) 레티노산 유사물질 및 저해물질을 모두 검색할 수 있고,4) 레티노산과 유사작용을 나타내는 환경 오염물질의 세포독성을 확인할 수 있으며, 5) 감도가 매우 높은 특징을 갖는다.