일반기술

사람의 하인두 편평상피암에서 유래한 신규 세포주 ＰＮＵＨ-12 확립 및 특성화

본 발명은 사람의 하인두 편평상피암에서 유래하는 세포주(PNUH-12; 수탁번호 KCLRF-BP-00022)를 확립하는 방 법으로서, 두경부 악성종양 환자에게서 악성 고형 종양조직을 채취하는 단계; 상기 조직을 무균처리하여 겐타마이신(g entamycine) 및 펀지존(fungizone)이 함유된 MEM 배지에 착상시켜서 세포배양실로 옮기는 단계; 무균적 환경하에 조직을 1 내지 3㎜ 크기로 파쇄한 후, 적정 조건하에서 콜라게나제 B 및 DNase로 밤새 처리하는 단계; 상기 조직 조각 들을 10% 우태아 혈청, 겐타마이신(50㎍/㎖), 니스타틴(50㎍/㎖)이 함유된 MEM 배지가 담긴 페트리디쉬로 옮겨 배 양을 실시하면서 관찰하는 단계; 상피세포와 섬유아세포의 성장이 진행되면 감별 트립신 처리와; 스크래핑에 의한 선택 적 분리과정을 거쳐 섬유아세포를 제거하고 순수한 종양세포만 성장시키는 단계; 세포들을 50대 이상 계대배양시키는 단계; 및 50대 이상 계대배양시킨 편평상피암 세포주를 수립하고 특성을 확립하는 단계로 이루어진다.본 발명자들은 본 발명에 의해 새로운 세포주 PNUH-12를 수립하고 그 특성을 분석하였다. 이 세포주는 두경부악성종 양의 다양한 연구, 즉 암세포의 분화, 침습, 전이, 발암유전자와 억제유전자의 발현양상, 항암제와 방사선에 대한 감수 성과 내성, 생체반응조절물질에 대한 항암효과, 단세포군 항체의 개발, 암표지항원의 개발 등에 유용하게 활용될 수 있 을 것으로 기대된다. 현재 여러 연구소와 연구자들이 각 분야에서 암세포주를 수립하기 위하여 노력하고 있음에도 국내 에서 수립된 암세포주가 부족한 실정임을 감안할 때, 본 발명은 향후 두경부 악성종양의 다방면의 연구에 적극적으로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.