일반기술

인간 Ｌａｄ 유전자 프로모터에 의해 발현이 조절되는재조합 리포터 유전자를 포함하는 형질전환 세포주 및이를 이용하여 면역조절제 화합물을 검색하는 방법

LAD 단백질이 T 세포의 활성에 중요하며 활성화된 T 세포에서만 LAD 단백질이 발현됨을 이용하여 인간 LAD 프로모터의 활성을 조절할 수 있는 면역조절제의 고효율 스크리닝에 유용하게 사용될 수 있는 세포주-기초 스크리닝 시스템을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 인간 Lad 프로모터에 리포터 유전자가 융합되어 외부 자극에 대한 TCR의 반응에 따라 인간 Lad 프로모터에 의해 리포터 유전자의 발현이 조절되면서 발현된 단백질의 양을 쉽게 측정할 수 있는 재조합 유전자 컨스트럭트를 제작하고, 이를 형질전환시킨 세포주에 다양한 화합물을 처리한 후 Lad 프로모터에 의해 유도된 리포터 유전자의 발현 정도를 측정하여 LAD 단백질의 면역조절제로 사용될 수 있는 화합물을 선별할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.본 발명의 목적은 T 임파구의 비정상적인 활성화가 수반되는 면역질환의 치료를 위해 LAD 단백질의 발현을 조절할 수 있는 면역조절제를 용이하게 검색할 수 있는 고효율의 세포-기초 스크리닝 시스템을 제공하는 것이다.본 발명은 T 세포 수용체 (T CELL RECEPTOR, TCR) 자극에 의해 활성이 조절되는 인간 LAD (LCK-ASSOCIATED ADAPTER PROTEIN) 유전자의 프로모터에 리포터 유전자가 융합된 재조합 유전자 컨스트럭트, 이의 형질전환 세포주 및 이를 이용하여 LAD 단백질의 면역조절제 (IMMUNO MODULATING AGENT)를 검색하는 방법에 관한 것으로, 본 발명의 세포주 및 검색방법은 TCR 자극에 의한 인간 LAD 프로모터의 활성 변화를 리포터 유전자의 발현 정도로 용이하게 확인할 수 있으므로 인간 LAD 프로모터 활성 조절을 통하여 LAD 단백질의 발현을 조절할 수 있는 면역조절제를 검색하는데 유용하게 사용될 수 있다.