일반기술

감자에서인간의인터루킨-2단백질생산방법

본 발명은 빠른 재분화 특성을 갖는 감자를 토대로 인간의 인터루킨-2 (interleukin-2) 단백질을 고등식물에서 발현시켜 인터루킨-2에 의존성이 있는 동물세포를 이용하여 감자에서 생산된 인터루킨-2의 활성을 이용한 감자의 성장촉진용도에 관한 발명으로,담배식물체에 의한 사람인터루킨-2의 제조방법보다는 비용이 적게 드는 감자를 이용하여 유용 단백질을 대량 생산할 수 있는 체계를 모색하고 유전자 운반체를 제작하여,인터루킨-2 유전자가 식물 특히 감자에서 어떤 효과를 갖는지 분석하고 산업적인 효용가치를 높이는 한편, 유전자 발현의 조절기구를 추적하고자 한다.이에 본발명은 벡터(Vector)pSSK-1을 이용하여 35S CaMV 프로모터(promoter)와 형질전환체의 선별을 위한 마커(marker)인 네오마이신 포스포트렌스퍼레이즈 II(neomycin phosphotransferase II, NPT II) 그리고 GUS(β-glucuronidase) 유전자를 내재하고 있는 pBI121 벡터(vector)를 조작하여 GUS(β-glucuronidase) 유전자 대신 인터루킨-2 유전자로 대치해,이를 식물 감염 균인 아그로박테리움(Agrobacterium)을 이용 본 발명에 의해 확립한 재분화 조건을 이용하여 다음 그림 1과 같이 감자에 인터루킨-2 유전자를 발현되도록 한 감자에서 인간의 인터루킨-2 단백질 생산방법과 인터루킨-2 형질전환체에 의한 감자의 성장촉진용도.인터루킨-2 (interleukin-2) 발현기작 분석을 위한 벡터 제작단계에 있어서, pBI121 벡터에서 제한효소인 BamH Ⅰ과 Sac Ⅰ을 이용감자에서 인간의 인터루킨-2 (interleukin-2) 단백질 생산방법하여 GUS (β-glucuronidase) 유전자 (1.9 Kb) 만을 제거한 후, BamH Ⅰ부위는 클레나우 절편 (klenow fragment)를 이용하여 앤드 필링(end filling) 시키고, Sac Ⅰ부위는 멍빈 뉴클리에이즈(mung bean nuclease)를 이용하여 양쪽 부위 모두를 평활 말단 (blunt end)로 만들어 준후, 이를 T4 DNA리가아제 (ligase)를 이용하여 평활 말단 집합 (blunt end ligation) 해 유도된 평활 말단 (blunt end) 부위의 효소부위 (enzyme site)는 BamH Ⅰ부위를 갖게 한후, BamH Ⅰ부위에 인터루킨-2 (interleukin-2) 유전자를 삽입함을 특징으로 하는 감자에서 인간의 인터루킨-2 단백질 생산방법.