일반기술

재조합 벡터, 재조합 효모 및 그것을 이용한 글루코스옥시데이즈의 대량 생산 방법

○ 기술발명의 목적: 글루코스 옥시데이즈를 최대로 생산하기 위한 재조합 벡터 방법○ 기술 요약 및 특징: 본 발명은 재조합 벡터와 재조합 균주를 이용한 글루코스 옥시데이즈의 대량 생산을 위한 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 pGAL1 프로모터, Aspergillus niger의 글루코스 옥시데이즈 유전자 및 GAL7 터미네이터를 포함하는 재조합벡터, 상기 재조합벡터로 형질전환된 효모 및 상기의 재조합 효모를 이용하여, 배지에 포도당, 콘 스팁 리쿼, 에탄올의 농도를 적절히 첨가하여 글루코스 옥시데이즈를 대량으로 생산하는 방법에 관한 발명이다.○ 색인어: 글루코스 옥시데이즈, 재조합 벡터, 재조합 효모, 대량 생산방법본 발명은 프로모터, 글루코스 옥시데이즈 및 터미네이터로 구성된 재조합벡터를 제공한다. 본 발명의 프로모터는 pGAL1, pGAL10, pGPD 중에서 선택된 프로모터가 바람직하다. 더욱 바람직하게는 본 발명의 프로모터는 pGAL1 프로모터가 적당하다. 본 발명의 글루코스 옥시데이즈는Aspergillus niger에서 유래된 것이 적당하다. 본 발명의 터미네이터는 GAL7 터미네이터 또는 글루코스 옥시데이즈 터미네이터가 적당하다.본 발명은 상기의 재조합벡터로 형질전환되고 UV로 돌연변이된 재조합 숙주세포를 제공한다. 본 발명의 재조합 숙주세포는 S. cerevisiaeAGG021가 적당하다.본 발명의 재조합 효모는 YEP(yeast extract peptone)을 기본으로 영양원이 풍부한 배지를 사용하여 외래 유전자 발현을 원활히 하도록 유도하여야 한다. 배양기간동안 재조합 효모는 round or oval-형으로 일정 시간이 경과함에 따라 모세포 혹은 모포자로부터, 출아 방식의 딸세포를 생성하여 개체수를 증가시킴으로 증식을 꾀한다. 야생형 효모는 mating type switch에 의해 단세포로부터 유성포자의 생성이 가능하나, 본 재조합 효모에 사용된 균주은 이의 생성이 억제된 돌연변이형이다.영양원으로는 폭넓은 범위의 탄소원과 질소원을 사용하였다. 또한 S. cerevisiae는 growth factor로 바이오틴을 필요로 하고 칼륨, 마그네슘, 구리, 철, 아연과 같은 미량원소를 필요로 한다. 본 재조합 효모는 특히 포도당과 효모 추출액이 첨가된 배지에서 성장 및 유전자 발현이 활발하다. 세포벽의 경우는 만난으로 구성된 비정형의 외층과 알카리 가용성 β-glucan으로된 중층 그리고 알카리 불용성 β-글루칸으로된 내경층을 포함한다.