일반기술

무라인 그래뉼로사이트-매크로파지 콜로니 자극 인자를포함하는 재조합 벡터와 그것을 발현하는 재조합아스퍼질러스 나이거

○ 기술발명의 목적: 무라인 GM-CSF를 대량 생산하기 위한 재조합 벡터○ 기술 요약 및 특징: 본 발명은 재조합 싸이토카인을 포함하는 벡터와 그것을 발현하는 재조합 숙주에 관한 발명으로, 더욱 상세하게는 무라인 그래뉼로사이트-매크로파지 콜로니 자극 인자를 포함하는 재조합 벡터와 그것을 발현하는 형질 전환된 재조합 숙주인 Aspergillus niger에 대한 발명으로 본 발명에 의해 특이성이 높은 무라인 그래뉼로사이트-매크로파지 콜로니 자극 인자를 대량으로 얻어서 여러 임상에 적용할 수 있다.○ 색인어: 무라인 GM-CSF, 재조합 벡터, 재조합 아스포질러스 나이거본 발명은 글리셀알데히드 3-인산 탈수소효소(GPD)의 프로모터와 터미네이터를 갖는 무라인 GM-CSF를 갖는 재조합 벡터를 제공한다.본 발명의 재조합 벡터는 pANGM-CSF 프라즈미드가 적당하다. 또한 본 발명은 상기 재조합 벡터를 발현하는 재조합 숙주세포인 사상성 진균을 제공한다.본 발명의 사상성 진균은 Aspergillus niger가 적당하다.본 발명의 Aspergillus niger는 Aspergillus niger KCTC 0661BP가 적당하다.사상성 진균는 완전세대가 밝혀지지 않은 불완전균에 속하며, 따라서 무성포자만을 형성한다. GM-CSF를 생산하는 재조합 A. niger는 다양한 종류의 배지에서 생장이 가능하나, 균체 생장을 위하여서는 2% malt extract, 2% glucose, 0.1% peptone을 포함하는 CM 배지가 사용되었고, 재조합 단백질 GM-CSF의 생산을 위하여서는 A. niger고유의 단백질 분해효소 생산능력을 억제시키기 위하여, 1% yeast extract, 2% peptone, 2% glucose, 100mM NH4 Cl, 0.6% urea를 포함하는 배지가 사용되었다.생육조건으로는 다양한 pH와 온도에서 생육이 가능하나 pH 5.0-6.0 와, 30℃-37℃에서 생장이 재조합 단백질 발현의 최적조건이었다.본 발명에서 특별한 언급이 없으면, 본 발명에 사용된 모든 화학물질, 배지 및 효소는 각각 Sigma Chemical CO.(St.Louis, MO), Difco Laboratories(Detroit,MI) 또는 Boehringer Mannheim(Mannheim, Germany)에서 구입하여 사용한다.