일반기술

담배의 인산수송자 유전자

○ 기술발명의 목적: 식물 세포 내로 인산을 흡수하는 능력을 보유하고 있는 단백질인 인산수송자를 암호화하는 담배 인산수송자 유전자의 염기서열 및 그로인한 아미노산 서열 제공○ 기술 요약 및 특징: 본 발명은 작물의 인산 흡수 및 이용 효율 개량을 가능하게 하는 담배 (Nicotiana tabacum L)의 인산수송자 유전자의 염기서열 및 아미노산 특성에 관한 것으로, 담배 인산수송자 유전자 (phosphate transporter)를 분리하여 효모용 유전자 발현 운반체인 p520에 삽입시켜 발현 재조합체인 pYNtPT1-1을 구축하고, 이 재조합 벡터 pYNtPT1-1을 인산수송자 유전자가 결여된 효모 돌연변이체인 NS219 세포에 도입하여 형질전환시킴으로써, 담배 인산수송자 유전자 및 그로부터 연역되는 아미노산 서열을 제공하는 뛰어난 효과가 있다.○ 색인어: 담배의 인산수송자 유전자, NtPT1-1, pYNtPT1-1, NS219, p520본 발명의 상기 목적은 감자 인산수송자 유전자의 RT-PCR법을 수행하기 위한 프라이머를 제작하여 감자의 mRNA를 PCR증폭하여 감자 cDNA를 제조하고 이 cDNA를 방사능 표지하여 담배 인산수송자 유전자 NtPT1-1를 분리한 후, 이 유전자를 유전자 운반체 pGEM-Easy에 서브클로닝하여 상기 유전자 NtPT1-1의 염기서열과 아미노산 서열 특성 및 단백질 분자구조를 분석하고, NtPT1-1을 효모용 유전자 운반체 p520 에 삽입시켜 구축한 재조합 벡터 pYNtPT1-1을 인산수송자 유전자가 결핍된 NS219 형질돌연변이체에 도입하여 형질 전환된 형질전환효모균주를 diazocoupling법으로 염색하고 저인산 배지 상에서의 생장율을 측정함으로써 달성되었다.이하, 본 발명의 구성을 설명한다.본 발명은 담배 인산수송자 유전자를 분리해 내기 위한 탐침으로 이용할 감 자 인산수송자 유전자의 RT-PCR법을 수행하기 위해 프라이머를 제작한 후 감자의 mRNA를 PCR 증폭하여 감자 cDNA를 준비하는 단계 ; 상기 감자의 cDNA를 방사능 표지하여 담배품종 '버리21' 의 인산수송자 유전자 cDNA인 Ntpt1-1를 분리하는 단계 ; 상기 분리한 Ntpt1-1를 유전자 운반체 pGEMT-Easy 벡터에 서브클로닝하는 단계 ; 상기 분리한 담배의 인산수송자 유전자 Ntpt1-1의 염기서열과 그로부터 연역된 아미노산의 서열 특성을 분석하는 단계 ; 상기 담배 인산수송자 유전자 NtPT1-1를 효모용 유전자 발현 운반체인 p520에 삽입시켜 재조합 벡터 pYNtPT1-1을 구축하는 단계 ; 상기 재조합 벡터 pYNtPT1-1와 순수 p520을 인산수송자 유전자 결여 효모돌연변이계통인 NS219에 도입하여 형질전환시키는 단계 ; NS219 형질전환체가 생산하는 인산 수송 기능과 세포 생장율을 알아보기 위하여 재조합 벡터 pYNtPT1-1와 순수 p520을 인산수송자 유전자 결여 효모돌연변이계통인 NS219에 도입하여 형질전환시킨 두 균주를 Diazo-coupling 반응용액으로 염색하고, 흡광도를 측정하여 생장률을 측정하는 단계로 구성된다.