일반기술

효모 발현 시스템을 이용한 인터루킨-18 단백질의생산방법

○ 기술발명의 목적: 효모 발현 시스템을 이용한 인터루킨-18 단백질의 생산방법○ 기술 요약 및 특징: (a) GPD 프로모터(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; GenBank accession number M13807) 또는 AG 프로모터(GenBank accession number J01314), (b) 세포외 분비신호서열, (c) 사이토카인 유전자 및 (d) 전사종결신호 서열을 포함하는 벡터, 이를 포함하는 형질전환주 및 재조합 인터루킨-18 단백질을 제공한다. 본 발명의 재조합 인터루킨-18 단백질은 바이러스 및 세균감염에 대한 면역증가용 조성물, 항암조성물로 사용할 수 있을 뿐만 아니라 인터루킨-18 항체제조를 위한 항원으로 사용할 수 있다.○ 색인어: 효모, 사이토카인, 인터루킨-18본 발명은 (a) GPD 프로모터(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; GenBank accession number M13807) 또는 AG 프로모터(GenBank accession number J01314), (b) 세포외 분비신호서열, (c) 사이토카인 유전자 및 (d) 전사종결신호 서열을 포함하는 벡터를 제공한다.또한 본 발명은 상기의 벡터를 포함하는 형질전환주를 제공한다.또한 본 발명은 상기의 형질전환주에서 발현된 재조합 단백질을 제공한다.또한 본 발명은 (a) 이종유전자를 GPD 프로모터(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; GenBank accession number M13807) 또는 AG 프로모터(GenBank accession number J01314), 세포외 분비신호서열 및 전사종결 신호를 포함하는 벡터에 도입하여 재조합 벡터를 제조하고, (b) 상기 재조합 벡터를 효모에 형질전환하고 및 (c) 형질 전환된 효모를 배지에서 배양하여 이종단백질을 생산하는 것을 포함하는 효모발현시스템을 제공한다.사이토카인을 최적으로 발현시킬 수 있는 시스템을 연구하여, 효모시스템을 확립하였다. 본 발명의 효모시스템은 외부 단백질을 쉽게 세포외로 다량 발현시킬 뿐만 아니라 신체 안전성이 공인되어 있어 발현된 재조합 단백질을 안전한 시료로 사용할 수 있다. 또한 생산된 재조합 단백질은 기존의 미생물에서 발현된 재조합 단백질에 비하여 월등한 생물학적 활성을 가진다.효모시스템에서 외부 단백질을 효과적으로 발현시킬 수 있는 벡터는 프로모터, 세포외분비신호 서열, 사이토카인 유전자 및 전사종결신호서열을 포함한다. 상기 프로모터, 세포외 분비신호서열, 전사종결신호서열은 효모에서 기능을 가지는 통상의 서열을 사용할 수 있다. 바람직한 프로모터는 GPD 프로모터(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter, GenBank accession number M13807) 및 AG 프로모터(하이브리드 프로모터: upstream activating sequence (UAS) of ADH2 (alcohol dehydrogenase 2 + GPD, GenBank accession number J01314)이고, 세포외분비신호는 아밀레이즈 1A 서열(amylase 1A ; 이하 Ramy1A 라 함, GenBank accession number X16509)이다. 바람직한 전사종결신호서열은 GAL7 (galactose-1-P uridyl transferase, GenBank accession number M12348)이다.