일반기술

이종중합형 패리틴 생산 방법

○ 기술발명의 목적: 이종중합형 패리틴 생산방법○ 기술 요약 및 특징: 본 발명은 생체이용성이 우수한 형태의 철을 다량 저장할 수 패리틴을 생산하는 방법에 관한 것으로, (a) 단일 숙주세포에 패리틴 라이트체인이 패리틴 헤비체인에 비하여 높은 분자비율로 발현되도록 고안한 패리틴 라이트체인 발현용 벡터 I 및 패리틴 헤비체인 발현용 벡터 II를 순차적으로 도입하고, (b) 상기 두 벡터가 모두 도입된 형질전환체를 선별하고 및 (c) 상기 형질전환체를 배양하여 이종중합형 패리틴을 발현시키는 것을 포함하는 이종중합형 패리틴 생산방법을 제공한다.○ 색인어: 패리틴, 철, 이종중합형본 발명의 이종중합형 패리틴은 패리틴 라이트체인 및 헤비체인이 조합된 형태로, 바람직하게는 라이트체인이 헤비체인에 비하여 높은 비율로 조합된 것이다. 더욱 바람직하게는 헤비체인:라이트체인이 1:5 내지 1:10이다. 상기 비율범위를 벗어날 경우 철 흡수율 및 저장율이 현저히 감소될 수 있다.본 발명의 이종중합형 패리틴 생산방법은 (a) 단일 숙주세포에 패리틴 라이트 체인이 헤비체인에 비하여 높은 비율로 발현되도록 고안한 패리틴 라이트체인 발현용 벡터 I 및 패리틴 헤비체인 발현용 벡터 II를 도입하고, 상기 두 벡터로 형질전환 된 형질전환체를 제조하고 및 (b) 상기 형질전환체를 배양하여 이종중합형 패리틴을 발현시키는 것이다.숙주세포는 형질전환여부를 확인할 수 있도록 최소 2개 이상의 영양요구성(auxotrophic) 표현형을 가지며, 본 발명에서는 일예로 우라실 및 루이신 영양요구성 표현형을 기재한다. 또한 숙주세포는 외부 단백질 발현을 변성시킬 수 있는 위험성을 제거하기 위하여 프로테아제 결핍성 균주가 바람직하다. 일예로, PEP4 대립유전자가 비활성화된 것일 수 있다.바람직한 숙주세포는 사카로마이세스 세레비지아 2805(MATαpep4::HIS3 prb1-δCan1 GAL2 his3 ura3-52)과 사카로마이세스 세레비지아 15Dau(MAT ade1 his2 leu2-3,112 trp1-1 ura3Δns)를 교배시켜 제조한 자낭포자 후대, 사카로마이세스 세레비지아 2805-a1 내지 19이다. 상기 사카로마이세스 세레비지아 2805-a1 내지 19는 2개의 선별마커(ura -및 leu - )를 가지며, pep4 - 유전자형이다.패리틴 라이트체인 및 헤비체인은 서로 다른 비율로 발현시키기 위하여, 각 서브유닛은 플라스미드 카피수가 다른 벡터에 클로닝할 수 있다. 바람직하기로는 패리틴 라이트체인은 고카피 벡터에 클로닝하고, 헤비체인은 저카피 벡터에 클로닝하는 것이며, 발현정도를 엄격하게 조절하기 위하여 양 서브유닛은 모두 동일한 프로모터하에 발현되도록 한다. 상기 프로모터는 효모에서 발현가능한 공지의 프로모터이다.