일반기술

ＨＮＦ－１α가 발현하는 세포에서 치료 유전자를 발현시키기 위해 Ｌ－ＰＫ 프록시말 프로모터를 이용한 재조합 발현 벡터

* 주요 내용서열번호 15로 L-PK 프록시말 프로모터(liver-type pyruvate kinase proximal promoter), 서열번호 16의 폴리링커와 SV40 바이럴 인핸서를 포함하되, 도 5b로 표시되는 것을 특징으로 하는 HNF-1α가 발현하는 세포에서 치료유전자를 발현시킬 수 있는 재조합 발현벡터 pLFB1[KCCM-10472].* 과제본 발명자들은 RNA 전사효소가 간에서 작동될 수 있는 기본 프로모터를 개발하기 위하여 연구 노력한 결과, 약 3.2 kb인 L-PK(liver-type pyruvate kinase) 프로모터에 존재하는 TATA 박스와 HNF-1α결합 염기 서열이 존재하는 서열(-96/+13), 즉 L-PK 프록시말 프로모터를 기본 프로모터로 사용하면, 상기의 문제를 해결할 수 있었다. L-PK 프록시말 프로모터는 약 3.2 kb의 L-PK 프로모터에서 유래되었으며, L-PK(liver-type pyruvate kinase) 유전자의 프로모터 역할을 하는 것으로 이미 알려져 있으나, HNF-1α가 발현하는 세포에서 치료유전자를 발현시키기 위해 사용될 수 있는 재조합 발현벡터의 기본 프로모터 용도로 사용된 예는 아직 연구된 바 없다. 즉 상기 프로모터에 인핸서를 부착시키면 인핸서에 결합한 전사인자들이 TATA 박스에 결합된 RNA 전사효소를 활성화시키는데 HNF-1α가 필수불가결하다. 다시 언급하면 HNF-1α가 없다면 인핸서에 결합한 전사인자들이 TATA 박스에 결합된 RNA 전사효소를 활성화시키기 어렵다는 것이다. 즉 L-PK 프록시말 프로모터를 이용하면 어떤 종류의 인핸서가 부착되었다 할지라도 HNF-1α가 발현하는 세포에서 치료유전자를 발현 조절할 수 있는 재조합 발현벡터를 작제함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.따라서, 본 발명은 HNF-1α가 발현하는 세포에서 치료유전자를 발현시키기 위해 L-PK 프록시말 프로모터를 이용한 재조합 발현벡터를 제공하는데 그 목적이 있다.* 내용본 발명은 HNF-1α가 발현하는 세포에서 치료유전자를 발현시키기 위해 L-PK 프록시말 프로모터를 이용한 재조합 발현벡터에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 L-PK 프록시말 프로모터(liver-type pyruvate kinase proximal promoter)는 유전자 전사에 필요한 RNA 전사 효소(RNA polymerase II)가 결합할 수 있는 염기서열(TATA box)이 존재하고, HNF-1α(Hepatocyte Nuclear Factor-1 α) 전사인자가 결합할 수 있는 염기서열이 존재하는데, 전사인자인 HNF-1α는 L-PK TATA 박스를 활성화시키지는 못하지만 다른 인핸서(바이럴 인핸서)를 L-PK 프록시말 프로모터에 부착시키면, 이 바이럴 인핸서에 결합하는 전사인자들이 HNF-1α가 발현하는 세포에서 L-PK TATA 박스 결합인자들을 활성화함을 확인함으로써 L-PK 프록시말 프로모터를 기본프로모터로 이용하고 이 프로모터에 인핸서(enhancer)를 부착시켜 작제한 재조합 발현벡터에 관한 것이다. 따라서, 이와 같은 L-PK 프록시말 프로모터를 기본 프로모터로 하는 재조합 벡터는 HNF-1α가 발현하는 간과 같은 장기에서 유전자요법을 위한 치료유전자를 적절히 발현시킬 수 있다.* 효과본 발명은 HNF-1α가 발현하는 세포에서 치료유전자를 발현시킬 수 있는 기본 프로모터로 L-PK 프록시말 프로모터를 사용하였고, 상기 기본 프로모터에 다른 인핸서 등을 부착하여 사용하면 그 인핸서의 성격에 따라 치료유전자 발현을 조절할 수 있다. 특히, L-PK 프록시말 프로모터의 이용으로 간에서 치료유전자의 발현 및 조절을 용이하게 할 수 있는 기반을 마련하였다.