일반기술

ＢＣＲＰ 변이 유전자의 검출방법

본 발명은 BCRP 변이 유전자의 검출방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 PCR법과 파이로시퀀싱법을 사용하여 BCRP 변이 유전자를 검출하는 방법에 관한 것이다.BCRP(Breast cancer resistance protein)는 ATP 에너지를 이용하여 약물을 세포 밖으로 수송하는 단백질로, 독소루비신(doxorubicin), 토포테칸(topotecan), 미토산트론 안트라사이클린(mitoxantron anthracyclines) 및 이리노테칸(irinotecan) 등의 여러 가지 항암제에 대해 내성 기작과 관련이 있는 것으로 알려져 있다.최근 BCRP는 유전적 다형성과 이로 인한 단백질의 기능 변이와의 상관관계가 보고 되고 있다. 특히 BCRP V12M 변이는 단백질이 세포내 비정상적으로 배치되어 단백질 기능의 차이가 발생하고, BCRP Q126Stop 변이는 단백질 번역과정 중 비정상적인 종결로 인하여 불완전한 단백질을 생성하여 BCRP 고유의 기능을 발휘하지 못하며, 또한 BCRP Q141K 변이는 ATP 분자와의 결합부위가 변형된 형태로, 약물 수송 기능에 차이를 유발한다. 본 기술의 내용은 다음과 같다.첫째, 혈액 시료로부터 추출한 DNA를 주형으로 하여 중합효소 연쇄반응을 이용한 BCRP V12M, BCRP Q126Stop 및 BCRP Q141K 유전자의 증폭둘째, 증폭된 BCRP 유전자 단편을 주형으로 하여 BCRP V12M, 변이를 분석하기 위한 두번빼 엑손 증폭 및 파이로시퀀싱을 이용한 변이 탐색셋째, 증폭된 BCRP 유전자 단편을 주형으로 하여 BCRP Q126Stop 변이를 분석하기 위한 네번째 엑손 증폭 및 파이로시퀀싱을 이용한 변이 탐색넷째 증폭된 BCRP 유전자 단편을 주형으로 하여 BCRP Q141K 변이를 분석하기 위한 다A번째 엑손 증폭 및 파이로시퀀싱을 이용한 변이 탐색본 발명의 BCRP 변이 유전자의 검출방법은 BCRP의 단일염기 다형성 바람직하게는, BCRP V12M, BCRP Q126Stop 및 BCRP Q141K 변이를 신속하고 정확하게 검출할 수 있는 것을 특징으로 한다. 상기한 BCRP 변이들은 특히 한국인에서 높은 빈도로 발생하는 것으로 알려져 있어, 질병의 진단 및 치료를 위하여 신속 정확하게 BCRP 변이들을 검출할 수 있는 방법의 개발이 요구되고 있다.첫째, 본 발명자들은 BCRP 변이 유전자의 검출방법을 연구하던 중 PCR법과 파이로시퀀싱법을 이용하여 BCRP 변이 유전자를 종래의 제한효소처리법이나 자동염기서열분석법에 비해 매우 빠르고 정확한 변이 유전자 판별할 수 있는 방법이다.둘째, 상기 본 발명에 따른 방법은 약제내성을 갖는 환자나 약물의 체내 동태의 개인차와의 BCRP 변이성과의 상관관계를 파악하여, 약물 처방 및 치료 과정을 선택하는데 활용할 수 있다.셋째, 본 발명에 따른 방법은 BCRP 변이를 신속하고 정확하게 진단함으로써 BCRP 단백질의 단일염기 다형성과 다약제내성 개인차 및 약물동태 개인차간의 상관관계를 확립하여, BCRP 단백질의 변이에 의한 질환의 진단 및 치료에 이용될 수 있다.