일반기술

금-결합 이차항체를 이용한 면역조직화학 염색 방법

본 기술은 원래 존재하는 항원을 효소 작용이나 증폭단계없이 면역조직화학 염색을 시행하여 일차항체에 부착된 이차 항체양을 부착된 gold colloid 자체의 색깔로 표현하도록 함으로써 기존 방법에 비하여 정확한 정량보고가 가능하도록 하고, 면역조직화학 염색 시간을 단축하며, 간단한 방법으로 면역조직화학 염색을 시행하여 슬라이드를 관찰할 수 있도록 한다.●기존 면역조직화학 염색법이 정량적 관찰이 어려운 단점이 있고 단계가 복잡하고 시간이 많이 소요되어 이를 극복하기 위해 다음의 방법을 고안하였다. 단계는 아래와 같다. 1) 2차항체에 gold colloid를 부착시킨다. gold colloid에 항체를 부착시키는 기술은 이미 흔히 이용되고있으며 많은 수의 신속 검사용 제품들이 분석하고자하는 물질의 일차 항체에 gold colloid를 부착시켜 사용하고있다. 기존의 효소를 항체에 부착시키는 것에 비해 간단하고 값싸게 부착시킬 수 있다는 장점이 있다. 2) 면역조직화학 염색 방법은 기존 방법과 같은 방법으로 조직 준비, 일차항체 반응, 세척의 과정을 거치고 이후 gold colloid가 부착된 이차항체를 반응시킨다(상온, 5분 - 30분). 3) 세척 후 대조 염색 후 글리세린 봉입한다. 4) 현미경으로 관찰한다.●현재 기술은 이차 항체 중 Immunoglobulin G는 용이하게 금입자를 부착시킬 수 있으나 Immunoglobulin M 에는 부착 기술이 부족한 실정이다. 기존의 이차 항체 중의 상당 부분이 Immunoglobulin M이기 때문에 여기에다 금입자를 부착시키는 기술개발이 시급하다. 현재 단계는 적은 농도의 Immunoglobulin M에만 부착할수 있는 단계까지 실험이 되어있는 단계이므로 상용화가 가능한 고농도까지 높이는 것이 과제라 하겠다. 이 기술만 완료되면 기존 이차항체 모두에 적용이 가능하여 대량 생산을 저렴한 비용으로 할 수 있을 것이다. ●현재 여러 외국회사(국내 소모량의 90%이상)와 소수의 국내 회사에서 일차 항체를 비롯한 면역조직화학 염색키트를 생산 공급하고 있는데 기존 효소가 부착된 이차항체와 함께 금부착이차항체를 같이 제공한다면 우위를 점하는데 크게 기여할 수 있어서 단순한 이차항체만이 아니라 일차항체까지를 포함하는 면역조직화학 염색용 소모 시약을 대체해갈 수 있을 것이 기대된다. ●현재 병원에서 사용되는 면역조직화학 염색 키트의 50%를 대체한다면 종합병원에서는 월 1키트, 대형 병원에서는 규모에따라 5-10키트 정도 소모가 예측된다.