일반기술

아스퍼질러스 플레이버스의 α－아밀라제의 활성을 억제하는 신규한 제비콩 ｌａｂＡＩ 단백질을 코딩하는 ｌａｂＡＩ 유전자 및 그의 용도

본 발명은 아스퍼질러스 플레이버스(Aspergillus flavus)의 α-아밀라제(α-amylase)의 활성을 억제시키는 신규한 labAI (Lablab purpureus alpha-amylase inhibitor) 단백질, labAI 유전자 (서열번호 1과 2) 및 그 용도에 관한 것으로, 게놈워킹 (Genomic Walking) PCR방법에 의해 분리한 콩과(legume)인 제비콩(Lablab purpureus)으부터 분리한 α-아밀라제 억제제(α-amylase inhibitor) 활성 및 렉틴(lectin) 활성을 가지는 신규한 labAI 단백질, labAI 유전자 및 그 용도에 관한 것이다. 본 발명은 서열번호 3과 4로 표기되는 아미노산 배열의 폴리펩타이드를 코드하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 서열번호 1 및 서열번호 2의 유전자, 이 유전자를 발현시켜 얻어지는 유전자 산물, 이 유전자를 갖는 재조합발현벡터, 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 아미노산서열을 갖는 단백질 등에 관한 것이다. 본 발명의 신규한 labAI 유전자는 작물과 미생물 등의 형질전환에 이용되어 아스퍼질러스 플레이버스(Aspergillus flavus)를 비롯한 진균류(fungus)에 내성을 가지는 작물개발과 친환경 미생물제제의 개발에 유용하게 이용될 수 있다.본 발명은 제비콩(Lablab purpureus) 잎에서 AILP를 암호화하고 있는 유전자 (labAI-1과 labAI-2)를 클로닝하여 구조를 분석하였다. 발명은 아스퍼질러스 플레이버스(A. flavus)의 오염시 생성되는 발암물질인 AF의 합성을 억제하기 위한 방법으로 알파-아밀라제의 억제자일뿐 아니라 AILP를 암호하는 신규한 유전자를 얻기 위하여, 제비콩의 잎에서 분리한 게놈 DNA를 이용하여 일부 밝혀진 AILP의 펩타이드를 코딩하는 염기서열을 바탕으로 하여 두 개의 유전자 (labAI-1과 labAI-2)를 분리하였다. 본 발명에 의한 labAI-1과 labAI-2의 아미노산 서열들과 렉틴-아세린-알파-아밀라제 저해제 패밀리의 아미노산서열들을 비교한 결과, 아미노산수준에서 labAIs단백질은 AIs와 약 36.%, lectin(PHA)과 54~57%, AIL과 39.%의 상동성을 가져 신규한 단백질이라 할 수 있다. 본 발명에 의한 단백질은 알파-아밀라제 저해활성 뿐만 아니라 렉틴(lectin) 활성을 가지는 것을 특징으로 한다. 나아가 서열번호 1과 서열번호 2의 염기서열 전체 또는 그것의 일부로 이루어지는 유전자의 형질전환용 단백질발현벡터를 포함하는 형질전환체를 제공한다. 본 발명은 labAI-1과 labAI-2 유전자 또는 labAI-1과 labAI-2 단백질은 탐침으로 이용하여, labAI 유전자의 유사체 또는 labAI 단백질 유사체를 탐색하는 방법을 제공한다. 본 발명에 의한 labAI-1과 labAI-2 단백질은 이를 유효성분으로 포함하는 알파-아밀라제 저해제 또는 진균류 관련 질병 저해제로서 이용될 수 있으며, 충전제 등을 혼합하여 친환경 미생물제제로 이용될 수 있다.