일반기술

삼일열말라리아의 적혈구 침투를 막는 인간 단세포군 항체

본 발명은 삼일열말라리아의 적혈구 침투를 막는 인간 단세포군 항체에 관한 것으로서, 삼일열원충(Plasmodium vivax) DBP(Duffy Binding Protein)에 특이적으로 결합하여 DBP와 적혈구 표면의 Duffy 수용체와의 결합을 효율적으로 막는 재조합 인간 scFv(Single Chain variable Fragments) 항체를 개발함으로써 적혈구의 더피 항원(Duffy antigen)과 DBP와의 결합을 억제할 수 있으며 향후 삼일열말라리아 치료제 및 백신 개발에 기여할 수 있는 인간 단세포군 항체에 관한 것이다.본 발명은 삼일열원충(Plasmodium vivax) DBP(Duffy Binding Protein)에 특이적으로 결합하여 DBP와 적혈구 표면의 Duffy 수용체와의 결합을 효율적으로 막는 재조합 인간 scFv(Single Chain variable Fragments) 항체를 개발함으로써 적혈구의 더피 항원(Duffy antigen)과 DBP와의 결합을 억제할하는 scFv 항체와 그 서열(폴리뉴클레오타이드 및 아미노산)을 그 특징으로 한다. 항체는 scFv 형태로서 기본적으로 "경쇄가변부위-링커단백질-중쇄가변부위"로 이루어져 있다. 본 발명에서 이용되는 재조합 인간 scFv 항체 라이브러리는 국내 삼일열원충에 감염된 환자의 B-림프구에서 RNA를 추출하고 RT-PCR을 이용한 cDNA를 만들고 인간 특이 항체 프라이머를 이용하여 각 항체분절을 증폭하여 파지미드 벡터인 pComb3X에 클로닝하여 발현하였다. 상기 발현 벡터는 lac 프로모터를 포함하여 있어 숙주 세포에서 scFv 항체 유전자의 발현유도를 이소프로필-b-D 티오갈락토피라노시드(IPTG)를 처리하여 할 수 있다. 본 발명의 발현벡터는 scFv 재조합 항체의 정제를 용이하게 하기 위하여 6× his(hexahistidine)의 태깅 단백질(tagging protein)이 scFv 항체의 N-말단에 융합되어 있는데, 항원성이 없고 항체의 3차 구조 형성시 폴딩에 영향을 주지 않는다. 또한, 숙주에서 발현된 항체를 정제할 때 친화성 크로마토그래피로 신속하게 정제 할 수 있는 이점이 있다. 따라서, 본 발명은 경쇄가변부위가 서열번호 15, 16 및 17 중에서 선택된 1종과, 중쇄가변부위가 서열번호 18, 19 및 20 중에서 선택된 1종의 아미노산 서열을 함유하는 삼일열원충(Plasmodium vivax) 분열소체(merozoite)의 DBP(Duffy binding protein) 항원에 특이적으로 결합하는 scFv 재조합 항체를 포함할 수 있다. 적혈구의 더피 항원과 DBP와의 결합을 억제할 수 있으며 향후 삼일열말라리아 치료제 및 백신 개발에 기여할 수 있다.