일반기술

소 고환의 히아루로니다제 PH-20

본 발명의 목적은 소 고환의 히아루로니다제 PH-20 단백질 및 이를 코딩하는 유전자를 제공하고, 이 유전자의 염기서열 및 아미노산 서열의 특성을 규명하여 PH-20 단백질을 대량생산할 수 있도록 한 기술이다. 본 발명의 소 고환의 히아루로니다제 PH-20단백질은 암진단, 관절장애 치료, 안과수술, 피부유연제 등으로 유용하게 사용될 수 있으며, 효모 발현 시스템에 적용시킴으로써 PH-20단백질에 대해 알려지지 않은 다른 특성을 규명하고 단백질을 대량 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.히아루로니다제 PH-20 단백질은 474개의 아미노산으로 구성되어있으며 이전에 보고된 서열과는 아미노산 서열이 95%의 상동성 보이며 돼지의 것과 69% 상동성, 토끼, 기아나 피그, 인간, 원숭이, 여우, 생쥐 및 노르웨이 쥐와는 53%-63%의 상동성을 보이며, 아미노산 서열 35번째와 36번째 사이를 절단할 수 있는 신호 서열을 포함한다.글리코실레이션은 히아루로니다제의 활성의 필수적으로, NxS 또는 TxT로 기재된 인식 모티프에서 일어나며 소 PH-20 아미노산 서열에 최소한 5개의 N-글리코실레이션 부위가 존재한다. 본 발명의 PH-20은 글리코실레이션되는 단백질이어서 이를 효모에서 발현시켜 또 다른 특성 규명 및 상기 단백질을 대량 생산하는데 유용하게 사용가능하며, 1422개의 뉴클레오타이드로 구성된 서열번호 5로 기재되는 염기서열의 유전자는 상기 단백질을 코딩하는 유전자를 제공하며, 이의 염기서열보고는 현재 전례가 없다.히아루로니다제 PH-20은 과거에는 소나 돼지등의 동물로부터 분리하여 사용하고 있었으며 이렇게 동물로부터 분리 정제하여 사용하는 경우는 안전성에 있어서 문제가 되나 본 방법은 효모를 이용한 대량생산 기술로 동물 유래의 바이러스 오염 등 안전성에 전혀 문제가 없는 제품을 생산 가능하게 해준다.