일반기술

단백질간의 상호 결합을 조사할 수 있는 이중 라이브러리 단백질 결합 검색방법에 의한 검색방법 및 이에 이용되는 재조합 효모 균주

본 발명은 효모를 이용한 기존의 투-하이브리드 (two-hybrid) 시스템을 발전시킨 것으로 이중 라이브러리 단백질 결합 검색 방법 (double library two-hybrid system: DLTS) 및 이에 이용되는 재조합 효모 균주들에 관한 것이다.; 본 발명에 따르면, 단일 단백질이 아닌, 라이브러리 수준의 단백질들의 결합 쌍들을 동시에 효율적으로 검색하기 위한 방법을 제공할 수 있다. a) 효모 균주 내의 URA3 을 파괴한 a 타입 균주를 제조한 후, URA3 가 GAL1 프로모터에 의해 발현되는 플라스미드를 도입하는 단계; b) 유전자 재조합 방법을 이용하여 효모 균주 내의 URA3 이 GAL1 프로모터에 의해 발현되도록 직접 수정하여 α타입 균주를 제조하는 단계; c) 상기 제조된 a 타입 균주 및 α타입 균주에 베이트(bait) 라이브러리 및 프레이(prey) 라이브러리를 각각 형질 전환하는 단계; d) 상기 형질 전환된 a 타입 균주 및 α타입 균주를 각각 5-FOA(5- fluoroorotic acid)를 포함하는 배지에서 배양하면서 가짜 양성 반응을 선택적으로 제거하는 단계; 및, e) 상기 선택 과정에서 살아 남은 두 타입의 형질전환 효모를 메이팅(mating) 시켜 단백질-단백질 결합 쌍들을 검출하는 단계를 포함하는, 이중 라이브러리 단백질 결합 검색 방법.