일반기술

Factor inhibiting HIF-1α (FIH) 활성 측정 및 조절제 탐색용 단일클론항체 (SHN-HIF1α) 및 하이브리도마

SHN-HIF1α는 FIH에 의해 803 아스파라진 잔기가 수산화된 hypoxia inducible factor 1α (HIF-1α)를 특이적으로 인식하는 항체임.FIH는 저산소 상태에서 유도되어 혈관생성, 적혈구생성 및 해당작용 효소드 다양한 단백질의 전사를 유도하는 HIF-1α의 803 아스파라진 잔기를 수산화하고 저산소 상태에서도 비교적 높은 활성을 나타내는 효소로, 허혈성질환 치료제의 target이 될 가능성이 높음.SHN-HIF1α는 biotin 표지 펩타이드 기질과 함께 사용하여 면역효소분석 (ELISA), 형광기반분석 (FIA 및 FRET) 및 칩분석 (형광분석칩 및 SPR)등의 다양한 방법으로 FIH 조절제 탐색법의 개발이 가능함.항체를 이용한 분석법은 간접적인 기존의 측정법에 비하여 ① 직접 수산화를 측정하할 수 있으며, ② 감도가 수십배이상 뛰어나고, ③ 조절제 종류에 따른 제약점도 극복할 수 있는 만은 장점 및 ④ 초고속 탐색법 (HTS)에 적용이 가능하며, 연구목적으로는 세포내 HIF-1α의 수산화 분석에 사용할 수 있음.○ 기술특성 - FIH 조절제 초고속 탐색 - 감도가 높아, library 농도를 낮게 사용할 수 있어 탐색능을 향상시킬 수 있고, 부가적으로 library 비용을 절감 할 수 있음. - 다양한 FIH 조절제 탐색 및 분석시스템으로 개발이 가능함. - 연구용으로 in vivo HIF-1α의 수산화 분석에 활용가능함.○ 활용분야 및 기대효과 - 뇌졸중, 심근경색 및 당뇨등에 허혈성 질환은 주변세포의 저산소 상태를 유발되는데, FIH 억제제는 HIF-1α의 전사를 활성화할 수 있으므로, 허혈성 질환 치료제로 개발 될 수 있음. - 본 항체를 이용한 시스템은 FIH 억제제 탐색 및 억제활성 측정에 유용하게 사용될 수 있음. - 저산소 상태의 암세포에서는 HIF-1α가 활성화되는데, FIH 활성을 증가시키는 조절제는 HIF-1α의 기능을 억제하므로, 항암제로 개발이 가능함. 본 항체를 이용한 시스템은 FIH 활성 증진제 탐색에 유용하게 사용될 수 있음. - 본 항체는 세포내 HIF-1α의 수산화를 측정할 수 있다. 그러므로 세포내에서 FIH에 의한 HIF-1α 수산화 및 이를 조절하는 다양한 신호전달 및 조절제 분석에 활용할 수 있으며, 조절 단백질 타겟발굴에 활용할 수 있음.